利用CRISPR/Cas9技术制备成对框基因2敲除小鼠

• 作者: 李荣山 王敏 石祥呈 蔚洪恩 赵敏
• 来源期刊: 解剖学报
• 学科: 医学
• 关键词: 成对框基因2 CRISPR/Cas9技术 基因敲除 肾脏发育障碍 免疫印迹法 小鼠
• 年，卷（期）: 2020,（4）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 613-617
• 页数: 5页
• 分类号: R361+1
• 语种: 中文
• DOI: 10.16098/j.issn.0529-1356.2020.04.023

摘要

目的 利用成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)/重组CRISPR相关核酸酶9(Cas9)技术双切口法制备成对框基因2(Pax2)敲除小鼠,为探讨Pax2基因在多个系统发育的作用提供动物模型.方法 根据Pax2基因序列设计sgRNA,设计出的sgRNA和Cas9体外转录后显微注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中,F0代小鼠出生后取其基因DNA测序鉴定基因型.共获得8只F0代小鼠,使敲除成功的F0代小鼠与野生C57BL/6J小鼠交配,获得F1代小鼠,后均采用基因成功敲除的小鼠与C57BL/6J小鼠进行交配,可获得稳定的Pax2基因敲除小鼠.结果 成功获得可稳定繁殖的P ax2杂合子基因敲除小鼠,其Pax2基因缺失1628 bp;组织HE染色显示,敲除小鼠的肾小球数量明显减少;Western blotting结果显示,敲除小鼠的肾皮质Pax2蛋白表达较野生型小鼠减少.结论 利用CRISPR/Cas9技术可成功构建Pax2杂合子基因敲除小鼠,为进一步研究Pax2基因的作用奠定基础.