聚嘧啶束结合蛋白相关剪接子高表达对糖基化终末产物诱导下人视网膜微血管内皮细胞氧化损伤的作用

• 作者: 东莉洁 刘勋 徐嫚鸿 李筱荣 林婷婷 洪亚茹 漆晨 王琼
• 来源期刊: 中华眼底病杂志
• 关键词: 多聚嘧啶区结合蛋白质 糖基化终产物,高级 视网膜血管/细胞学 内皮细胞/生理学 细胞,培养的
• 年，卷（期）: 2020,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 633-640
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.cn511434-20191231-00423

摘要

目的 观察探讨聚嘧啶束结合蛋白相关剪接子(PSF)高表达对糖基化终末产物(AGEs)诱导下人视网微血管内皮细胞(hRMECs)氧化损伤的保护作用及相应分子机制.方法 将hRMECs分为正常组、空载组、PSF组、锌原卟啉(ZnPP)组及PSF+ ZnPP组进行实验.正常组细胞使用含有10％胎牛血清、青霉素/链霉素的DMEM培养基,置于37℃C、95％空气、5％ CO2的密闭恒温培养箱中培养.空载组细胞采用空载慢病毒感染.PSF组细胞采用过表达PSF慢病毒感染.ZnPP组细胞采用ZnPP(10 mol/L)处理2h.PSF+ZnPP组细胞采用过表达PSF慢病毒感染后,再用ZnPP(10 mol/L)预处理2h.后四组细胞辅以AGEs刺激,HE、Hoechst33258染色法和流式细胞法观察PSF高表达对细胞损伤的保护作用以及ZnPP对PSF的拮抗作用.采用Western blot检测细胞中血红素氧合酶-1(HO-1)、磷酸化(p)细胞外调节蛋白激酶(ERK)、核因子2相关因子2(Nrf2)的蛋白表达.引入ERK通路的特异性拮抗剂U0126,Western blot验证U0126对PSF蛋白所诱导的HO-1表达的逆转作用.结果 HE染色和Hoechst33258染色结果显示,PSF组受损细胞核数较正常组明显增加,较PSF+ZnPP组明显减少,差异均有统计学意义(F=27.5、38.7,P＜0.05).流式细胞法结果显示,PSF组细胞产生的ROS较正常组明显增加,较PSF+ZnPP组明显减少,差异有统计学意义(F=126.4,P＜0.05).Western blot检测结果显示,PSF组HO-1蛋白表达量较正常组、空载组明显增加,差异均有统计学意义(F=70.1,P＜0.05);AGEs处理30、60、120、240min时pERK的蛋白表达量与15 min时比较,差异均有统计学意义(F=474.0,P＜0.05);PSF+/U0126-组HO-1、Nrf2蛋白表达量较PSF-/U0126-组明显增加,PSF+/U0126+组HO-1、Nrf2蛋白表达量较PSF+/U0126-组明显降低,差异有统计学意义(F=30.2、489.4,P＜0.05).结论 PSF高表达可以通过活化ERK通路,促进Nrf2转位入核进而诱导HO-1表达,从而保护hRMECs免受AGEs诱导的氧化损伤.