MiRNA-326抑制人椎间盘退变髓核细胞活力和凋亡的机制

• 作者: 刘殿鹏 高笛
• 来源期刊: 临床与病理杂志
• 关键词: miRNA-326 椎间盘退变髓核细胞 细胞凋亡 实时荧光定量PCR 流式细胞术
• 年，卷（期）: 2020,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 814-822
• 页数: 9页
• 字数: 5887字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3978/j.issn.2095-6959.2020.04.002

摘要

目的:探讨过表达miRNA-326对椎间盘退变(intervertebral disc degeneration,IDD)髓核(nucleus pulposus,NP)细胞凋亡的影响及其作用机制.方法:构建miRNA-326慢病毒表达载体,在293T细胞中获得重组慢病毒,经感染NP细胞得到稳定过表达细胞系GV369-miRNA-326-NP,同时设置空载体GV369-NP组与空白组.荧光显微镜观察慢病毒载体的标签蛋白[绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)]的表达,实时荧光定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)方法检测miRNA-326的表达,流式细胞术检测细胞凋亡,荧光素酶报告基因分析验证miRNA-326与FasL的靶向关系,蛋白质印迹法检测细胞中凋亡相关蛋白FADD,caspase-3,Bcl-2及Bax的表达,使用试剂盒检测细胞线粒体膜电势的变化情况.结果:荧光显微镜下示,经慢病毒感染的过表达细胞系和空载体细胞系均出现绿色荧光,而空白组未见绿色荧光.与空白组相比,GV369-miRNA-326-NP组中miRNA-326的表达水平、Bcl-2表达水平和线粒体膜电位明显升高,而细胞凋亡率,FADD,caspase-3和Bax的表达水平明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05);GV369-NP组与空白组相比,差异无统计学意义(P>0.05).荧光素酶报告基因分析证实miRNA-326与FasL存在靶向关系.结论:MiRNA-326可抑制IDD NP细胞发生凋亡,既可通过靶向性调控外源性FasL/Fas通路参与caspase-3和FADD介导的细胞凋亡,也可通过线粒体途径对细胞凋亡发挥作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘殿鹏	安阳市第六人民医院骨科	10	30	3.0	5.0
2	高笛	安阳市第六人民医院骨科	5	6	2.0	2.0