单一微挤压一次性3D打印皮肤组织方法的初步研究

• 作者: 乐颖影 侯瑞兴 唐林峰 巨积辉 张广亮 张苹 苏浩 金光哲
• 来源期刊: 中华手外科杂志
• 关键词: 皮肤 成纤维细胞 HaCaT细胞 微挤压打印 组织结构
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 28-32
• 页数: 5页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1005-054X.2020.01.008

摘要

目的 探索单一微挤压一次性3D打印皮肤组织方法的可行性.方法 从人皮肤真皮层分离、培养成纤维细胞并通过免疫荧光染色鉴定.以成纤维细胞和HaCaT细胞为种子细胞,用明胶、透明质酸和纤维蛋白原组成支架材料,通过微挤压法打印真皮层和表皮层,凝血酶交联支架材料.通过HE染色和免疫荧光染色观察3D打印皮肤组织的细胞分布.用活/死细胞染色试剂盒检测3D打印皮肤组织内细胞的活性.采用甲苯胺蓝渗透试验检测打印皮肤组织的屏障功能.结果 分离培养的成纤维细胞波形蛋白阳性细胞占98％以上.当支架材料中纤维蛋白原浓度在真皮层和表皮层分别为5 mg/ml和1 mg/ml,成纤维细胞(4× 106个/ml)打印8层,HaCaT细胞(5× 106个/ml)打印1层时,制备的3D打印皮肤组织气液培养7d后,HE染色和免疫荧光检测显示表皮层和真皮层分层良好,表皮层厚度为(63.5±3.5)μm.3D打印皮肤组织浸没培养2d和气液培养7d,细胞活性分别为(90.2±0.9)％和(95.3±0.8)％.3D打印组织皮肤气液培养7d后和正常皮肤具有类似的屏障功能.结论 我们建立了单一微挤压一次性3D打印皮肤组织的方法,成功制备了结构、表皮层厚度和屏障功能类似于正常人皮肤组织的组织工程皮肤,有可能成为未来批量生产组织工程皮肤的有效方法.