近暗散白蚁β-葡糖苷酶基因RpBg7的克隆及其在毕赤酵母中的表达

• 作者: 伍志伟 安世恒 宋安东 尹新明 李琰 楚君鹏 肖元玺 苏丽娟 赵鹏飞 魏纪珍
• 来源期刊: 昆虫学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 近暗散白蚁 β-葡糖苷酶 纤维素酶 毕赤酵母 木质纤维素
• 年，卷（期）: 2020,（9）
• 所属期刊栏目: 生理与生化
• 页码范围: 1039-1047
• 页数: 9页
• 分类号: Q965.9
• 语种: 中文
• DOI: 10.16380/j.kcxb.2020.09.001

摘要

[目的]白蚁是自然界中利用木质纤维素能力很强的生物,是纤维素酶的天然资源库.本研究旨在挖掘新来源的纤维素酶基因,为生物质能源的高效利用提供新的天然酶.[方法]根据前期蛋白质组测序的结果,利用PCR结合RACE克隆了近暗散白蚁Reticulitermes perilucifugus β-葡糖苷酶7(β-glucosidase 7)基因RpBg7 cDNA全长序列;通过生物信息学软件分析了RpBg7的序列;用表达载体pPICZαA在毕赤酵母Pichia pastoris X-33中表达RpBg7蛋白,并用4-硝基苯基-β-d-吡喃葡萄糖苷(4-nitrophenyl β-d-glucopyranoside,4pNPG)为底物检测了表达的RpBg7蛋白的酶活性.[结果]获得了近暗散白蚁的一个内源性β-葡糖苷酶7基因RpBg7(GenBank登录号:MN944395),其开放阅读框长1 485 bp,编码495个氨基酸残基.RpBg7蛋白预测分子量为57 kD,属于糖苷水解酶1 (glycoside hydrolase 1,GH1)家族,具有保守的碱性氨基酸残基Glu 187和Glu394.通过毕赤酵母表达系统成功表达RpBg7蛋白.酶活性分析结果表明,毕赤酵母胞外分泌蛋白粗酶液和胞内蛋白粗酶液中RpBg7酶活性分别为4.43和7.47 U/mL.[结论]克隆并利用毕赤酵母表达了近暗散白蚁的GH1家族的一个β-葡糖苷酶7基因RpBg7,为后期纤维素酶的改造和应用提供了条件.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宋安东		147	1485	21.0	31.0
2	苏丽娟		44	160	7.0	10.0
3	安世恒		39	184	8.0	11.0
4	尹新明		68	577	13.0	21.0
5	李琰		10	21	2.0	4.0
6	赵鹏飞		18	82	4.0	8.0
7	伍志伟		4	0	0.0	0.0
8	肖元玺		6	5	1.0	1.0
9	楚君鹏		7	3	1.0	1.0
10	魏纪珍		4	0	0.0	0.0