大乳头水螅增殖细胞核抗原基因的克隆及再生进程中的表达分析

• 作者: 吴香恒 段丽丽 潘红春 王茹梦 程秀珍
• 来源期刊: 水生生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 大乳头水螅 增殖细胞核抗原 再生 实时定量PCR 免疫印迹分析
• 年，卷（期）: 2020,（4）
• 页码范围: 790-798
• 页数: 9页
• 分类号: Q959.131|Q949.2
• 字数: 6963字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7541/2020.095

摘要

研究以增殖细胞标记物-增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)蛋白为切入点,采用RACE(Rapid amplification of cDNA ends)方法克隆了大乳头水螅(Hydra magnipapillata)PCNA基因的cDNA序列.该cDNA序列包含1240 bp,其中837 bp为编码区,编码的蛋白质预测分子量为30.93 kD.把PCNA基因ORF中的部分序列克隆到原核表达质粒pET-28b(+)中,重组质粒转化E.coli BL21(DE3)菌株,IPTG诱导后成功表达重组PCNA蛋白,再用该重组蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体用于PCNA蛋白的免疫印迹分析(Western blotting assay,WB).采用实时定量PCR(quantitative Real-time PCR,qPCR)及WB方法检测水螅头部再生进程中其PCNA表达水平的动态变化,结果表明在再生进程的中后期阶段水螅PCNA表达量呈现一定程度的上调.结果暗示水螅头部再生进程的中后期阶段其伤口及附近区域可能存在细胞分裂活动.