铜绿假单胞菌实时荧光重组酶介导链替换核酸扩增方法建立及应用

• 作者: 刘立兵 姜彦芬 孙晓霞 李睿文 王建昌 王金凤 袁万哲 陈志敏 项佳林
• 来源期刊: 中国食品卫生杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 铜绿假单胞菌 ecfX基因 实时荧光重组酶介导链替换核酸扩增 等温扩增
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 所属期刊栏目: 实验技术与方法
• 页码范围: 524-529
• 页数: 6页
• 分类号: R155
• 语种: 中文
• DOI: 10.13590/j.cjfh.2020.05.010

摘要

目的 建立一种快速检测铜绿假单胞菌的实时荧光重组酶介导链替换核酸扩增(real-time RAA)方法.方法 基于铜绿假单胞菌ecfX基因设计特异性引物和exo探针,通过灵敏性、特异性和疑似菌株检测评估所建立方法的有效性.结果 Real-time RAA方法在39℃等温条件下反应20 rmin即可实现对铜绿假单胞菌的有效检测;特异性强,仅对铜绿假单胞菌出现特异性扩增;灵敏性高,对铜绿假单胞菌基因组DNA的检出限为3.0× 103 fg/反应,对纯培养铜绿假单胞菌的检出限为1.0× 103 CFU/反应.应用所建立的real-time RAA方法对分离的36株疑似铜绿假单胞菌进行检测,结果均为铜绿假单胞菌,同VITEK 2 Compact生化鉴定方法和real-time PCR方法结果一致.结论 本试验所建立的real-time RAA方法反应快速、操作简单、可靠性高,可用于不同来源的铜绿假单胞菌的快速检测和鉴定.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李睿文		31	128	7.0	11.0
2	袁万哲		76	296	8.0	14.0
3	王金凤		13	44	4.0	6.0
4	陈志敏		5	31	3.0	5.0
5	刘立兵		2	0	0.0	0.0
6	王建昌		3	0	0.0	0.0
7	项佳林		1	0	0.0	0.0
8	孙晓霞		1	0	0.0	0.0
9	姜彦芬		1	0	0.0	0.0