重组毕赤酵母产青蛤Mytimacin抗菌肽的表达研究

• 作者: 吕星星 王莎莎 谢晶 赵震 钱韻芳 陶妍
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 青蛤 Mytimacin 毕赤酵母 重组表达 抑菌活性
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 150-158
• 页数: 9页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-0700

摘要

Mytimacin是主要在无脊椎动物中表达的Macin抗菌肽家族中的一员,具有较强的抗病原微生物活性,是利用重组DNA技术开发天然抗菌剂的良好候选者.通过RT-PCR从青蛤(Cyclina sinensis)闭壳肌中克隆编码Mytimacin成熟肽的基因,经3次PCR在该基因的5'端添加Xho I限制性酶切位点和信号肽酶识别位点、3'端添加Xba I限制性酶切位点和6×His,获得目的基因"CsMm";以pPICZαA为表达载体、毕赤酵母(Pichia pastoris)X-33为工程菌,构建重组毕赤酵母X-33/pPICZαA-CsMm.通过高浓度博来霉素筛选高拷贝酵母转化子,在28℃、250 r/min条件下,使用1.5％ 的甲醇诱导表达72 h;使用固化金属离子亲和层析(IMAC)对表达产物进行纯化,并通过MALDI-TOF-TOF质谱分析对纯化产物进行鉴定.另外,通过涂布法和浊度法考察重组CsMm的抑菌活性.结果表明:基于X-33/pPICZαA-CsMm重组毕赤酵母的外源表达获得了表达量为25.6 mg/L的重组蛋白,经MALDI-TOF-TOF质谱鉴定其为分子量约7.8 kD的预期重组CsMm.抑菌试验证明重组CsMm对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、大肠杆菌(Escherichia coli)和副溶血性弧菌(Vibrio Parahemolyticus)具有明显的抑菌活性.构建的重组毕赤酵母X-33/pPICZαA-CsMm能有效合成具有生物学活性的重组青蛤Mytimacin,旨为贝类来源天然小分子抗菌剂的开发提供可资参考的技术途径.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谢晶	上海海洋大学食品学院上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心	409	4858	36.0	48.0
2	陶妍	上海海洋大学食品学院上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心	34	379	6.0	19.0
3	吕星星	上海海洋大学食品学院上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心	3	0	0.0	0.0
4	王莎莎	上海海洋大学食品学院上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心	3	0	0.0	0.0
5	赵震	上海海洋大学食品学院上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心	3	0	0.0	0.0