奶牛乳房炎病原菌多重PCR检测方法的建立

• 作者: 于景丽 希尼尼根 李桂宇
• 来源期刊: 黑龙江畜牧兽医（下半月）
• 学科: 农学
• 关键词: 奶牛乳房炎 金黄色葡萄球菌 牛支原体 大肠杆菌 多重PCR
• 年，卷（期）: 2020,（6）
• 页码范围: 60-63,68
• 页数: 5页
• 分类号: S855|Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.13881/j.cnki.hljxmsy.2019.08.0166

摘要

为了同时检测奶牛乳房炎多种病原菌,试验采用金黄色葡萄球菌(S.aureus) nuc基因、牛支原体(M.bovis)oppD/F基因、大肠杆菌(E.coli) 16S-23S rRNA基因内转录间隔区作为靶标设计3对特异性引物,在优化单菌退火温度的基础上确定多重PCR的退火温度,建立S.aureus、M.bovis和E.coli的多重PCR检测方法,验证多重PCR的重复性、特异性、敏感性及实用性.结果 表明:基于单一PCR三者共同的最佳退火温度(55.3℃、56.5℃、57.8℃)优化多重PCR退火温度,最终确定57.8 ℃C为三者最佳的退火温度.该方法能扩增出长度为237 bp(S.aureus)、333 bp(M.bovis)、634 bp(E.℃oli的基因片段;靶标菌特异性扩增而非靶标菌无扩增条带,最低检测浓度分别为S.aureus 1 pg/μL、M.bovis 1 pg/μL、E.coli 100 fg/μL;正常乳样和临床乳房炎乳样均检出S.aureus(25.9％、53.8％)、M.bovis(10.3％、17.9％)和E.coli(32.8％、71.8％),但乳房炎乳样的阳性检出率高于正常乳样.说明本研究建立的多重PCR方法特异性和敏感性强、稳定性和实用性高,具有良好的推广应用前景.