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一个RNAi载体上反向重复片段的测序策略
一个RNAi载体上反向重复片段的测序策略
作者:
倪嘉瑶
杨文文
王华忠
胡蕊洁
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
RNA干扰
载体构建
反向重复
测序
摘要:
相邻的反向重复DNA片段有形成单链内二级结构的倾向,属于一种测序困难的DNA模板.解决RNAi载体插入的反向重复片段的测序问题,为该类载体正确性的测序验证奠定基础.采用常规分子克隆方法构建表达小麦TaATG2串联反向重复片段的RNAi载体,设计2种策略对经菌落PCR初步鉴定的载体进行测序验证:一种是以完整的载体质粒为模板进行测序;另一种是先对载体进行酶切处理,切除反向重复片段中的一个后对保留另一个片段的线性载体进行测序.结果表明,第一种测序策略受到串联反向重复片段形成的单链内部二级结构的影响,测序信号在反向重复片段处出现衰减或乱峰,无法读取序列.第二种测序策略排除了2个反向重复片段之间的干扰,保留在载体上的片段测序信号清晰,序列准确.采用酶切切除一个片段后进行测序的方法,经过2次酶切和2次测序可以有效地对载体上的2个反向重复片段分别进行序列测定,进而确认构建载体的正确性.
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一个RNAi载体上反向重复片段的测序策略
来源期刊
生物技术通报
学科
关键词
RNA干扰
载体构建
反向重复
测序
年,卷(期)
2020,(5)
所属期刊栏目
技术与方法
研究方向
页码范围
205-210
页数
6页
分类号
字数
语种
中文
DOI
10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-0977
五维指标
作者信息
序号
姓名
单位
发文数
被引次数
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G指数
1
王华忠
天津师范大学生命科学学院天津市动植物抗性重点实验室
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杨文文
天津师范大学生命科学学院天津市动植物抗性重点实验室
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倪嘉瑶
天津师范大学生命科学学院天津市动植物抗性重点实验室
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胡蕊洁
天津师范大学生命科学学院天津市动植物抗性重点实验室
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载体构建
反向重复
测序
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
生物技术通报
主办单位:
中国农业科学院农业信息研究所
出版周期:
月刊
ISSN:
1002-5464
CN:
11-2396/Q
开本:
大16开
出版地:
北京海淀区中关村南大街12号
邮发代号:
18-92
创刊时间:
1985
语种:
chi
出版文献量(篇)
7180
总下载数(次)
42
总被引数(次)
53964
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