绵羊c-Myc与EGFP融合蛋白的真核表达及其对细胞增殖的调控作用

• 作者: 李俊玲 李孟心 杜荣 秦健 郑腾飞 郭丽荣 韩高链
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 绵羊 c-Myc基因 EGFP 真核表达 生物信息学 细胞周期相关基因 调控元件
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 所属期刊栏目: 遗传育种
• 页码范围: 965-975
• 页数: 11页
• 分类号: S826.2
• 字数: 7068字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2020.05.008

摘要

为了探讨c-Myc基因对细胞增殖及相关基因表达的调控作用,本试验构建了c-Myc-(G4S)3-EGFP融合基因的真核表达载体pc-Myc-EGFP,并利用生物信息学分析了其结构和理化特征.转染后分别通过细胞计数和qRT-PCR检测了其对绵羊胚胎成纤维细胞(sheep embryonic fibroblasts,SEF)增殖及相关基因表达的影响,并利用启动子分析软件解析了相应的表达调控机制.酶切鉴定和测序结果表明,载体构建成功.生物信息学分析表明,绵羊c-Myc蛋白主要定位于细胞核,含有螺旋环螺旋(helix-loop-helix,HLH)结构域,其分子量为48 474.78 u.融合蛋白c-Myc-(G4S)3-EGFP有较强的亲水性,且含有31个磷酸化位点.因(G4S)3有较高的灵活度(9.848 5),两侧的c-Myc和EGFP都保持各自的空间构象且互不干扰.进一步的细胞试验结果表明,重组质粒pc-Myc-EGFP在SEF中能够表达.过表达c-Myc促进了SEF的增殖,使cyclin D2、Cdk4、Cdk6、cyclin E1、cyclin A2、cdc25A mRNA的表达水平分别升高至5.20、3.10、6.54、6.52、23.37和8.22倍(P＜0.01),E2F1 mRNA的表达升高至1.83倍(P＜0.05).启动子分析结果表明,各基因的5'调控区存在c-Myc和E2F1的结合元件.综上所述,绵羊c-Myc通过上调细胞周期相关基因的表达促进SEF细胞增殖,c-Myc的作用机制可能是通过直接作用于靶基因5'调控区的E-box元件,也可能是通过其他转录因子(如E2F1)的间接调控作用而实现.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杜荣	山西农业大学动物科技学院	24	132	6.0	11.0
2	李孟心	山西农业大学动物科技学院	3	1	1.0	1.0
3	韩高链	山西农业大学动物科技学院	4	1	1.0	1.0
4	郭丽荣	山西农业大学动物科技学院	4	1	1.0	1.0
5	李俊玲	山西农业大学动物科技学院	3	1	1.0	1.0
6	郑腾飞	山西农业大学动物科技学院	2	0	0.0	0.0