一种准确、简便测定CRISPR/Cas9基因编辑效率的方法

• 作者: 徐雪珍 朱丽颖 段芊芊 郑月萍 韩妮莎
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 生物学
• 关键词: CRISPR/Cas9 基因编辑 突变体筛选 脂肪酸组分分析
• 年，卷（期）: 2020,（2）
• 所属期刊栏目: 遗传育种·生理生化
• 页码范围: 299-305
• 页数: 7页
• 分类号: Q784
• 字数: 5079字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2020.02.007

摘要

CRISPR/Cas9基因编辑技术是近年来发展迅速的一项基因定点编辑技术,但对特定CRISPR/Cas9基因编辑技术的编辑效率进行有效评估的方法仍十分匮乏,本研究的目的是建立一种准确、简便测定CRISPR/Cas9基因编辑效率的方法.在我们的方法中,将与种子专一表达启动子(2S3)连接的mCherry荧光蛋白报告基因作为选择基因,并以编码脂肪酸脱氢酶FAD2的基因为靶序列;然后对经CRISPR/Cas9编辑的拟南芥种子进行脂肪酸组分分析,根据其组分变化计算该方法的编辑效率.结果显示,利用mCherry荧光蛋白报告基因的种子专一表达特性,可简便快速地筛选阳性的初级转化子和后代的无转基因突变子;而种子油脂分析法能快速、准确地鉴定CRISPR/Cas9编辑的突变体,可以精确地检测出核酸长度小至单个碱基对的突变,用该方法获得的CRISPR/Cas9基因编辑效率(54.5％～74.1％)远高于基于聚丙烯酰氨凝胶电泳法获得的编辑效率(3.7％～15.4％).说明,该方法检测CRISPR/Cas9基因编辑效率的高效性与可行性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱丽颖	浙江农林大学农业与食品科学学院	1	0	0.0	0.0
2	郑月萍	浙江农林大学农业与食品科学学院	2	0	0.0	0.0
3	徐雪珍	浙江农林大学农业与食品科学学院	1	0	0.0	0.0
4	段芊芊	浙江农林大学农业与食品科学学院	2	0	0.0	0.0
5	韩妮莎	浙江农林大学林业与生物技术学院	1	0	0.0	0.0