血管内皮生长因子-B对高糖环境下人视网膜色素上皮细胞凋亡的保护作用

• 作者: 李明新 赖诚
• 来源期刊: 眼科新进展
• 学科: 医学
• 关键词: VEGF-B ARPE-19细胞株 高浓度葡萄糖 凋亡 ERK1/2信号通路
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 430-434
• 页数: 5页
• 分类号: R774.1
• 字数: 4027字
• 语种: 中文

摘要

目的 探讨血管内皮生长因子-B(vascular endothelial growth factor-B,VEGF-B)对高糖环境下诱导的人视网膜色素上皮细胞(cultured human retinal pigmentepithelial cells-19,ARPE-19)凋亡的保护作用及其机制.方法 将ARPE-19细胞分为正常组(体积分数10％胎牛血清+5.6 mmol·L-1葡萄糖)、高糖组(体积分数10％胎牛血清+30 mmol·L-1葡萄糖)、药物组(100μg·L-1 VEGF-B+体积分数10％胎牛血清+30 mmol·L-1葡萄糖)、抑制组[20μmol·L-1 PD98059(ERK1/2阻滞剂)+100μg·L-1 VEGF-B+体积分数10％胎牛血清+30 mmol·L-1葡萄糖].倒置显微镜观察细胞的形态变化;CCK-8法检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot检测蛋白Bcl-2、Bax及细胞外信号调节激酶1/2(extracelluar regulated protein 1/2,ERK1/2)、p-ERK1/2表达水平;实时荧光定量PCR检测Bcl-2 mRNA、Bax mRNA的表达.结果 倒置显微镜发现,高糖组细胞皱缩变小变圆,正常组及药物组细胞体积大、有突起,抑制组细胞形态及数量接近正常组,少许细胞皱缩变圆,体积变小.CCK-8法检测显示,高糖组细胞较正常组存活率降低,药物组较高糖组细胞存活率升高,抑制组细胞存活率介于高糖组和药物组之间,差异均有统计学意义(均为P<0.05).流式细胞仪检测显示,高糖组较正常组细胞正常细胞率下降、细胞凋亡率升高,药物组较高糖组正常细胞率升高、细胞凋亡率下降,抑制组细胞凋亡率介于高糖组和药物组之间,差异均有统计学意义(均为P<0.05).Western blot和实时荧光定量PCR检测显示,高糖组较正常组Bcl-2蛋白及Bcl-2 mRNA表达减少、Bax蛋白及Bax mR-NA表达增多、Bcl-2/Bax蛋白及mRNA比值均降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05);药物组较高糖组Bcl-2蛋白及Bcl-2 mRNA增多、Bax蛋白及Bax mRNA减少、Bcl-2/Bax蛋白及mRNA比值均升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05);高糖组p-ERK1/2表达量较正常组增多、药物组p-ERK1/2较高糖组表达增多、抑制组p-ERK1/2表达量介于药物组和高糖组之间,差异均有统计学意义(均为P<0.05),四组总ERK1/2表达量不变,差异无统计学意义(P>0.05).结论 VEGF-B具有抑制高糖环境培养的ARPE-19细胞凋亡作用,其作用机制部分是通过ERK1/2信号通路,调节Bcl-2和Bax基因表达而实现.