表皮生长因子(EGF)对小鼠卵丘细胞自噬及胞吞相关蛋白表达的影响

• 作者: 何翃闳 余四九 崔燕 李秦 潘阳阳 王萌 王靖雷 马睿
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 表皮生长因子 自噬 胞吞 卵丘细胞
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 119-128
• 页数: 10页
• 分类号: S857.2|Q955
• 字数: 6229字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2020.01.012

摘要

自噬和胞吞是细胞内重要的生理活动,可调控细胞的生长状态以应对恶劣环境的威胁.为探究表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)对小鼠(Mus musculus)卵丘细胞自噬和胞吞活动的影响,本研究使用浓度为0、50、100、150、200 ng/mL的EGF及适宜浓度(40μg/mL)表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)抑制剂Gefitinib作用于小鼠卵丘细胞,提取细胞总RNA和总蛋白.利用qRT-PCR及Western-blot技术测定各浓度下自噬相关基因5(autophagy related gene 5,Atg5)、Bcl-2同源结构域蛋白(Bcl-2 homologous domain protein,Beclin1)、微管相关蛋白轻链3(microtubule-associated protein light chain 3,LC3)、小窝蛋白(caveolin,Cav)Cav1和Cav2的相对表达量,并结合免疫荧光技术对5种蛋白在细胞的表达定位进行比较分析.结果显示:Atg5、Beclin1、LC3、Cav1和Cav2五种蛋白均主要在卵丘细胞质表达.经EGF处理,基因表达水平上,Atg5、LC3及Cav1相对表达量显著上升,且在150 ng/mL处最高(P<0.05),而Beclin1、Cav2相对表达量显著下降,在150和200 ng/mL处最低(P<0.05);蛋白表达水平上,Atg5、Beclin1、LC3表达量均显著升高(P<0.05),且在150～200 ng/mL处最高(P<0.05),此外LC3Ⅰ和LC3Ⅱ在200 ng/mL处最高,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ在100 ng/mL处最高,Cav1、Cav2蛋白在50 ng/mL处表达量均显著升高(P<0.05),而在200 ng/mL处均显著降低(P<0.05).抑制EGFR后,基因表达水平上,Atg5、LC3和Cav1相对表达量显著升高,而Beclin1、Cav2表达量显著降低(P<0.05),蛋白表达水平上,Atg5、Beclin1、LC3、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ及Cav1表达量均显著增高(P<0.05或P<0.01),Cav2蛋白表达量显著降低(P<0.01).研究结果表明EGF可能参与调节Atg5、Beclin1、LC3、Cav1和Cav2的表达,对小鼠卵丘细胞的自噬和胞吞活动起重要调控作用.本研究为进一步研究EGF对小鼠卵丘细胞自噬和胞吞的调控机制提供参考依据.