树突状表皮T淋巴细胞对小鼠创缘表皮细胞增殖和凋亡的影响

• 作者: 刘勉 张小容 朱海杰 李雅舒 杨加彩 罗高兴 胡晓红 贺伟峰
• 来源期刊: 中华烧伤杂志
• 关键词: 伤口愈合 细胞增殖 细胞凋亡 树突状表皮T淋巴细胞 表皮细胞
• 年，卷（期）: 2020,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 122-130
• 页数: 9页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-2587.2020.02.008

摘要

目的 了解树突状表皮T淋巴细胞(DETC)对小鼠创缘表皮细胞增殖和凋亡的影响及其在创面愈合中的作用. 方法 选取无特殊病原体(SPF)级野生型C57BL/6健康8～12周龄雄性小鼠28只、SPF级8～12周龄T淋巴细胞受体δ敲除(TCR δ-/-)雄性小鼠60只用于如下实验.(1)采用随机数字表法取8只野生型小鼠分离表皮细胞、原代培养DETC,并于培养即刻及培养15、30 d行DETC形态学观察和采用流式细胞仪检测纯度.(2)采用随机数字表法取5只野生型小鼠、5只TCR δ-/-小鼠,分别设为野生型对照组、TCR δ-/-组,每只小鼠背部制作直径6 mm圆形全层皮肤缺损创面.观察伤后即刻及伤后2、4、6、8、10 d创面愈合情况、计算剩余创面面积百分比.(3)同实验(2)取小鼠,分组并制作全层皮肤缺损模型.伤后3d取创缘组织进行苏木精-伊红染色,检测新生上皮长度.(4)同实验(2)取小鼠,分组并制作全层皮肤缺损模型.伤后3d取创缘表皮组织,采用蛋白质印迹法检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,评估表皮细胞增殖情况.(5)同实验(2)取小鼠,分组并制作全层皮肤缺损模型.伤后3d取创缘的表皮组织消化成单细胞悬液,采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况.(6)取40只TCR δ-/-小鼠,同前行实验(2)～(5)检测,并采用随机数字表法分为TCR δ-/-对照组和TCR δ-/-+DETC组,每个实验每组5只小鼠.其中小鼠背部同前造成全层皮肤缺损,TCR δ-/-+DETC组小鼠伤后即刻于创缘多点注射1×105个DETC(溶解于100 μL磷酸盐缓冲液,纯度超过90％),TCR δ-/-对照组小鼠同法注射等体积磷酸盐缓冲液.对数据行重复测量方差分析、t检验及Bonferroni校正. 结果 (1)随着培养时间的延长,DETC树突状突起的数量逐渐增多.培养即刻,4.67％的细胞是T淋巴细胞,这部分T淋巴细胞中94.10％为DETC.培养15 d时DETC纯度达18.50％,培养30 d时DETC纯度达98.70％.(2)伤后即刻,TCR δ-/-组、野生型对照组小鼠的创面情况相似;TCR δ-/-组小鼠伤后2～10d的创面愈合速度慢于野生型对照组.与野生型对照组小鼠比较,TCR δ-/-组小鼠伤后2、4、6、8、10 d剩余创面面积百分比均明显升高(t=3.492、4.425、4.170、4.780、7.318,P＜0.O1).(3)TCR δ-/-组小鼠伤后3d创缘新生上皮长度为(359±15)μm,明显短于野生型对照组的(462 ±26)μm(t=3.462,P＜0.01).(4) TCR δ-/-对照组小鼠伤后即刻的创面情况与TCR δ-/-+DETC组相似;TCRδ-/-+DETC组小鼠伤后2～10d的创面愈合速度明显快于TCRδ-/-对照组.与TCR δ-/-对照组比较,TCR δ-/-+ DETC组小鼠伤后2、4、6、8、10 d剩余创面面积百分比明显降低(t=2.308、3.725、2.698、3.707、6.093,P＜0.05或P＜0.01).(5)TCR δ-/-+DETC组小鼠伤后3d创缘新生上皮长度为(465±31)μm,明显长于TCR δ-/-对照组的(375±21)μm(t=2.390,P＜0.05).(6)伤后3d,TCR δ-/-组小鼠创缘表皮细胞的PCNA表达量为1.25 ±0.04,明显低于野生型对照组的2.01 ±0.09(t=7.415,P＜0.01).(7)伤后3d,TCR δ-/-+DETC组小鼠创缘表皮细胞的PCNA表达量为1.62±0.08,明显高于TCR δ-/-对照组的1.05±0.14(t=3.561,P＜0.05).(8)伤后3d,TCR δ-/-组小鼠创缘表皮细胞凋亡率为(16.1±1.4)％,明显高于野生型对照组的(8.1±0.6)％(t=5.363,P＜0.01).(9)伤后3d,TCR δ-/-+DETC组小鼠创缘的表皮细胞凋亡率为(1 1.4±1.0)％,明显低于TCR δ-/-对照组的(15.4±1.4)％(t =2.377,P＜0.05). 结论 DETC可通过促进小鼠创缘表皮细胞的增殖、抑制其凋亡,参与创面愈合过程.