亚砷酸钠对HaCaT细胞DNA甲基转移酶的影响及N-乙酰半胱氨酸的干预效应

• 作者: 张爱华 李凤敏 韩进美 韩雪 黄红茜
• 来源期刊: 环境与职业医学
• 学科: 医学
• 关键词: 亚砷酸钠 HaCaT细胞 氧化应激 DNA甲基转移酶
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 原创精选
• 页码范围: 205-210
• 页数: 6页
• 分类号: R14
• 语种: 中文
• DOI: 10.13213/j.cnki.jeom.2020.19698

摘要

[背景]砷暴露可致人皮肤病变,砷所致的DNA甲基化改变是其主要的致病机制之一,但砷如何引起DNA甲基化改变目前尚未明确.[目的]本研究以永生化的人皮肤角质形成细胞(HaCaT)为研究对象,检测亚砷酸钠(NaAsO2)暴露对HaCaT细胞DNA甲基转移酶(DNMTs) mRNA和蛋白表达水平的影响,并探讨砷所致氧化应激与其所致DNMTs mRNA和蛋白表达水平改变之间的关联.[方法]给予HaCaT细胞不同浓度的NaAsO2(0、0.625、1.25、2.50μmol·L-1)处理,干预组给予10.0 μmol·L-1抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理4h后加入2.50 μmol·L-1 NaAsO2,染毒时间为72h.应用免疫荧光法检测细胞活性氧(ROS)含量,生化法检测细胞内丙二醛(MDA)含量,实时荧光定量PCR法检测细胞DNMT1、DNMT3α和DNMT3b mRNA水平,Western blotting法检测DNMTs蛋白水平.[结果]不同浓度NaAsO2处理HaCaT细胞72h后,HaCaT细胞ROS含量、MDA水平随染毒浓度的增加而升高(F趋势=441.675,P＜0.001;F趋势=22.430,P=0.012);1.25、2.50 μmol·L-1浓度组DNMT1 mRNA及蛋白表达水平均高于对照组(P＜0.05).随染毒浓度的增加,DNMT1 mRNA及蛋白表达水平升高(F趋势=30.280,P=0.001;F趋势=40.421,P＜0.001),DNMT3α mRNA及蛋白表达水平降低(F趋势=226.283,P＜0.001;F趋势=30.848,P=0.001),DNMT3b蛋白表达水平升高(F趋势=15.095,P=0.005);各染毒组DNMT3b mRNA表达水平与对照组相比,差异无统计学意义(P＞0.05).NAC处理后,与2.50 μmol·L-1 NaAsO2单独处理组相比,HaCaT细胞ROS含量、MDA水平、DNMT1 mRNA和蛋白表达水平均降低(P＜0.05),DNMT3a mRNA及蛋白水平无明显改变(P＞0.05),DNMT3b蛋白水平降低(P＜0.05),mRNA水平无明显改变(P＞0.05).[结论]NaAsO2可改变HaCaT细胞DNMTs mRNA及蛋白表达水平,这种变化可能与砷所致的氧化应激有关.