完全性肺静脉异位引流患儿的ARHGEF16基因突变筛查及突变功能分析

• 作者: 于昱 孙锟 张琪 王静 金理辉
• 来源期刊: 上海交通大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 完全性肺静脉异位引流 ARHGEF16 错义突变 RAC1 发育
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 所属期刊栏目: 临床研究
• 页码范围: 70-75
• 页数: 6页
• 分类号: R725.4
• 字数: 4133字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-8115.2020.01.011

摘要

目的·探究完全性肺静脉异位引流(total anomalous pulmonary venous connection,TAPVC)的发病机制,通过全外显子测序筛查出致病基因ARHGEF16,并对其进行功能验证.方法·收集78例TAPVC患儿及100例正常对照儿童的血液、临床资料及辅助检查结果,抽提全血DNA进行ARHGEF16突变筛查.构建ARHGEF16野生型及突变型表达质粒,转染293T细胞,通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)分别检测mRNA和蛋白的表达水平;通过软件Cytoscape进行蛋白与蛋白之间的相互作用分析.结果·在TAPVC患儿中发现ARHGEF16基因2个未报道的突变位点c.C236>T(A79V)和c.G619>C(G207R),在对照组中未发现.与野生型相比,突变型ARHGEF16 mRNA和蛋白表达量均上调.蛋白相互作用分析显示,ARHGEF16与RAC1可以直接相关联;通过RT-qPCR检测,发现在过表达ARHGEF16时,RAC1表达上调.结论·ARHGEF16的错义突变影响了ARHGEF16 mRNA及蛋白表达水平,过表达ARHGEF16可上调RAC1的表达,提示其可能通过对RAC1的调控参与TAPVC的形成及发展.