利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除团头鲂socs1重复基因

• 作者: 刘娟 赵心愉 邹曙明
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 团头鲂 CRISPR/Cas9 SOCS1 基因编辑
• 年，卷（期）: 2020,（12）
• 页码范围: 1937-1947
• 页数: 11页
• 分类号: Q789|S965.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.11964/jfc.20190311685

摘要

以团头鲂细胞因子信号传导抑制蛋白1(SOCS1)基因socs1a和socs1b为编辑对象,在线分析并筛选出合适的靶点合成向导RNA(guide RNA,gRNA),然后对1～2细胞期的团头鲂胚胎进行gRNA和Cas9蛋白的混合注射.通过荧光定量PCR技术在转录水平检测socs1a和socs1b的表达,并通过测序平台在DNA水平鉴定基因序列的突变,成功建立了多种socs1的突变品系.与同期野生型(WT)相比,socs1a突变杂合体(SOCS1a+/-)和socs1b突变杂合体(SOCS1b+/-)团头鲂生长性能增强、体质量显著增加,同时炎症因子基因中肿瘤坏死因子α基因(TNF-α)和白细胞介素6基因(IL-6)表达量显著增加,而白细胞介素1β基因(IL-1β)表达无明显变化.注射嗜水气单胞菌后,与野生型不同的是,IL-6和TNF-α在SOCS1a+/-和SOCS1b+/-团头鲂肝脏中的表达均有持续显著上升.本实验通过CRISPR/Cas9系统成功敲除了团头鲂socs1a和socs1b,为进一步探讨socs1的作用提供了一定的研究基础,同时为CRISPR/Cas9基因编辑技术在养殖鱼类中的合理应用提供了依据和借鉴.