不同实验条件对流式细胞术细胞周期分析结果的影响

• 作者: 秦建兵 李雯 衣昕 田美玲 何辉 金国华
• 来源期刊: 南通大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 细胞周期 流式细胞术 实验条件 大鼠
• 年，卷（期）: 2020,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 508-511
• 页数: 4页
• 分类号: R446
• 语种: 中文
• DOI: 10.16424/j.cnki.cn32-1807/r.2020.06.004

摘要

目的:探讨不同实验条件对流式细胞术细胞周期分析结果的影响.方法:采用大鼠C6细胞系,检测在不同的乙醇浓度、固定方式、染色时间、固定时间、样品流速及细胞浓度等实验条件下对细胞周期分析结果的影响.结果:75％乙醇固定细胞效果最佳,直接用无水乙醇固定会引起细胞不同程度的黏连聚集,浓度过低则导致固定不充分,从而影响分析结果(P＜0.05);将细胞沉淀用磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffered saline,PBS)重新悬浮后加入乙醇固定效果明显(P＜0.05);乙醇固定24 h以上效果佳,长时间-20 ℃保存对结果无影响(P＞0.05);细胞浓度过高可因染色不充分而影响分析结果(P＜0.05);样品流速加大对细胞周期分析结果的影响差异有统计学意义(P＜0.05);样品在染色后1～12 h内细胞周期的结果差异无统计学意义(P＞0.05),＜30min可因染料未充分结合而影响分析结果(P＜0.05).结论:在仪器设备状态良好的前提下,推荐先将细胞用PBS重悬,然后加入3倍体积的预冷无水乙醇,轻轻混匀打散细胞后置-20 ℃固定24 h以上,按每1×106个细胞加0.5 mL染液室温避光染色1h以上以低流速上样检测为佳.