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利用规律间隔成簇短回文重复序列/相关蛋白9系统敲减α2δ1对人肝癌细胞系Hep-12干性的影响
利用规律间隔成簇短回文重复序列/相关蛋白9系统敲减α2δ1对人肝癌细胞系Hep-12干性的影响
作者:
何琦
赵威
张志谦
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
0δ1
规律间隔成簇短回文重复序列/相关蛋白9
肝癌干细胞
基因敲减
自我更新
免疫印迹法
人
摘要:
目的 通过规律间隔成簇短回文重复序列/相关蛋白9(CRISPR/Cas9)系统敲减人肝癌细胞系Hep12中电压依赖性钙离子通道α2δ1的表达,观察α2δ1敲减后对肝癌细胞干性的影响.方法 设计3对靶向α281的向导(sgRNA),长度为20 bp,构建到lenti CRISPRv2-puro载体上,然后在体外检测sgRNA切割活性,利用慢病毒包装系统包装含有sgRNA的重组质粒,将包装好的病毒感染Hep-12细胞,2 d后加入嘌呤霉素筛选.利用Western blotting验证α2δ1的敲减效果和干性相关基因的表达.通过成球实验检测其体外自我更新能力的变化.结果 测序结果显示,sgRNA成功插入载体质粒;体外切割实验显示,3条sgRNA均有切割活性;Western blotting结果显示,α2δ1基因的表达显著降低,干性相关基因B细胞特异性莫洛尼白血病病毒插入位点1(BMI1)和Nanog的表达显著被抑制;无血清培养基成球实验结果表明,敲减α2δ1导致Hep-12细胞的体外自我更新能力减弱.结论 利用CRISPR/Cas9技术成功构建敲除α281基因的Hep-12细胞系;敲除α2δ1基因后能抑制Hep-12细胞肿瘤干细胞样特性.
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解剖学报
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医学
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规律间隔成簇短回文重复序列/相关蛋白9
肝癌干细胞
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自我更新
免疫印迹法
人
年,卷(期)
2020,(6)
所属期刊栏目
肿瘤生物学
研究方向
页码范围
882-887
页数
6页
分类号
R757.7
字数
语种
中文
DOI
10.16098/j.issn.0529-1356.2020.06.012
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解剖学报
主办单位:
中国解剖学会
出版周期:
双月刊
ISSN:
0529-1356
CN:
11-2228/R
开本:
大16开
出版地:
北京海淀区学院路38号
邮发代号:
创刊时间:
1953
语种:
chi
出版文献量(篇)
3719
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4
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