小干扰RNA-TLR9对高糖下大鼠视网膜神经节细胞凋亡的抑制作用及其机制

• 作者: 于璐 李旭晴 杨慧慧 袁慧娟 阚全娥 黄爱国
• 来源期刊: 中华实验眼科杂志
• 关键词: Toll样受体9 小干扰RNA 视网膜神经节细胞 高糖 凋亡 细胞培养
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 38-44
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2019.10.008

摘要

目的 探讨Toll样受体9(TLR9)对高糖下大鼠视网膜神经节细胞(RGC)-5凋亡的影响及小干扰RNA-TLR9(si-TLR9)对凋亡的抑制作用.方法 将体外培养的RGC-5细胞分为正常对照组、高糖组、高糖+阴性对照组和高糖+si-TLR9组,分别行正常培养、高糖培养、高糖下空质粒转染和高糖下siRNA-TLR9质粒转染细胞.采用实时PCR法检测各组细胞中TLR9 mRNA表达;采用MTT法检测各组细胞存活率;采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;采用caspase-3活性检测试剂盒检测各组细胞中含半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(caspase-3)活性;采用Western blot法检测TLR9及B淋巴细胞瘤-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和磷酸化(p)-p38MAPK蛋白的表达. 结果 与高糖+阴性对照组比较,高糖+si-TLR9组细胞中TLR9 mRNA和蛋白的相对表达量明显下降,差异均有统计学意义(均P＜0.05).高糖组和高糖+阴性对照组细胞存活率分别为(78.36±5.13)％和(75.12±4.25)％,较正常对照组的(95.48±7.25)％明显降低,差异均有统计学意义(均P＜0.05);高糖+si-TLR9组细胞存活率为(86.58±5.32)％,明显高于高糖+阴性对照组的(75.12±4.25)％,差异均有统计学意义(均P＜0.05).高糖组和高糖+阴性对照组细胞凋亡率分别为(13.23± 1.22)％和(12.52±1.38)％,较正常对照组的(2.26±0.15)％明显升高,差异均有统计学意义(均P＜0.05);高糖+si-TLR9组细胞凋亡率为(7.15±0.24)％,明显低于高糖+阴性对照组的(12.52±1.38)％,差异有统计学意义(P＜0.05).与高糖+阴性对照组比较,高糖+si-TLR9组细胞中bax蛋白表达量明显下降,bcl-2蛋白相对表达量明显增加,差异均有统计学意义(均P＜0.05).高糖+si-TLR9组细胞中caspase-3活性明显低于高糖+阴性对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).与高糖+阴性对照组比较,高糖+ si-TLR9组细胞中p-p38MAPK蛋白相对表达量明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 下调TLR9表达可抑制高糖诱导的RGC-5细胞凋亡,其作用机制可能与抑制p38MAPK信号通路活化有关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	阚全娥	河南省人民医院内分泌科	36	282	9.0	15.0
2	袁慧娟	河南省人民医院内分泌科	77	370	10.0	16.0
3	杨慧慧	河南省人民医院内分泌科	14	83	5.0	8.0
4	于璐	河南省人民医院内分泌科	17	69	5.0	7.0
5	李旭晴	河南省人民医院内分泌科	2	0	0.0	0.0
6	黄爱国		3	7	1.0	2.0