NCSTN基因沉默对HaCaT细胞增殖分化的影响

• 作者: 何艳艳 吴英达 张婉璐 张媛媛 徐浩翔 李文锐 李诚让 王宝玺 程萍
• 来源期刊: 中华皮肤科杂志
• 关键词: 化脓性汗腺炎 基因沉默 角蛋白细胞 细胞增殖 细胞分化 角蛋白质类 HaCaT细胞 NCSTN基因
• 年，卷（期）: 2020,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 704-709
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.35541/cjd.20190312

摘要

目的 检测NCSTN基因稳定沉默的人永生化角质形成细胞(HaCaT)增殖活性及相关分化蛋白的改变,初步探索反常性痤疮发病的可能机制.方法 构建慢病毒介导shRNA沉默NCSTN基因的HaCaT细胞模型(shRNA组),转染空载慢病毒的HaCaT细胞作为阴性对照组,实时定量PCR和Western印迹法检测NCSTN基因的沉默效率.CCK8法检测HaCaT细胞增殖活性,实时定量PCR和Western印迹法检测HaCaT细胞角蛋白(CK1、CK5、CK7、CK10、CK14、CK16、CK17、CK18、CK19、CK20)及其他分化分子(内披蛋白、兜甲蛋白)mRNA和蛋白的表达.两组计量资料的比较采用两独立样本t检验.结果 shRNA组NCSTN mRNA及蛋白表达(0.42±0.19、0.30±0.07)均显著低于阴性对照组(1.00±0.34、1.00±0.26;t 5.196、2.637,P＜0.001、＜0.05),基因沉默效率达70％.与阴性对照组相比,shRNA组HaCaT细胞明显增殖活跃,CK16、CK19蛋白表达显著下调(t=3.787、3.817,P＜0.01、＜0.05),终末分化分子内披蛋白表达明显降低(t=2.904,P＜0.05).结论 稳定沉默NCSTN基因表达会引起HaCaT细胞异常增殖分化,为后续探究NCSTN基因突变引起反常性痤疮提供新思路.