载阿霉素细胞膜纳米囊泡对黑色素瘤B16F10细胞的杀伤效应

• 作者: 关新刚 刘宁 夏薇 崔梅英 方楷漪 杨泽斌 王明月 王浩 陈丽
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 细胞膜 纳米囊泡 阿霉素 细胞内吞 杀伤效应
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 905-910
• 页数: 6页
• 分类号: Q28
• 语种: 中文
• DOI: 10.13481/j.1671-587x.20200502

摘要

目的:制备人胚胎肾细胞来源的细胞膜纳米囊泡(NVs),其内腔载阿霉素(DOX)得到新型纳米药物载NVs细胞膜DOX(NVs-DOX),探讨NVs-DOX的肿瘤细胞内吞作用及对黑色素瘤细胞的杀伤效应.方法:利用超速离心法提取HEK293细胞膜,脂质体挤出仪对细胞膜进行处理得到细胞膜NVs;应用电转化法将DOX担载于NVs的内腔,得到NVs-DOX,通过动态光散射检测NVs粒径.以不加囊泡细胞为对照组,细胞膜NVs为实验组,采用MTT法检测不同浓度(5、10、20、50和100 mg·L-1)NVs对NIH3T3细胞的生物相容性.以小分子DOX(10 mg·L-1)为对照组,不同浓度(0.001、0.005、0.010、0.050、0.100、0.500和1.000μmol·L-1)NVs-DOX为实验组,采用荧光显微镜成像和流式细胞术检测NVs-DOX在黑色素瘤B16F10细胞中的荧光分布情况;细胞毒性实验,MTT法检测各组细胞存活率;活/死细胞染色法检测NVs-DOX(1μmol·L-1)处理后的B16F10细胞死亡情况.结果:利用细胞膜材料制备平均粒径为254.3 nm的NVs,电转化法得到了粒径约为289.6 nm的NVs-DOX.MTT法检测,不同浓度NVs组NIH3T3细胞存活率均>100％;荧光成像检测,药物孵育3 h后,NVs-DOX组细胞核内荧光强度略低于小分子DOX组;流式细胞术检测,NVs-DOX组的内吞效率(91.07％)略低于小分子DOX组(95.47％);细胞毒性实验,NVs-DOX组与小分子DOX组均显示出对B16F10细胞浓度依赖性的杀伤效应,DOX浓度在0.1μmol·L-1时B16F10细胞存活率<20％,NVs-DOX组与小分子DOX B16F10细胞存活率比较差异无统计学意义(P>0.05);活/死细胞染色,NVs-DOX组与小分子DOX组黑色素瘤B16F10细胞中死细胞占总细胞比率比较差异无统计学意义(P>0.05).结论:成功制备了人胚肾细胞来源的细胞膜NVs及载DOX的新型纳米药物NVs-DOX,NVs-DOX具有较高的肿瘤细胞内吞效率及明显的黑色素瘤细胞的杀伤效应.