巢式聚合酶链式反应检测布鲁氏菌核酸DNA方法的建立

• 作者: 田国忠
• 来源期刊: 疾病监测
• 学科: 医学
• 关键词: 巢式PCR 布鲁氏菌 血液标本
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 246-250
• 页数: 5页
• 分类号: R446.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2020.03.015

摘要

目的 建立一种具有灵敏性高,特异性强的巢式聚合酶链式反应(PCR)方法检测血液标本中布鲁氏菌核酸DNA.方法 使用细菌基因组提取试剂盒提取纯菌核酸DNA;使用血液等组织基因组核酸DNA提取试剂盒提取血液标本核酸DNA,对提取的核酸DNA先行常规PCR预扩增,以扩增的PCR产物为模板进行荧光定量PCR第二次扩增(即巢式PCR).对纯菌提取的核酸DNA进行灵敏度和和特异性测试,构建巢式PCR的Cf值与核酸DNA拷贝数之关系曲线;检测临床血液标本核酸DNA,同时比较常规两种PCR方法检测结果.结果 常规PCR检测的灵敏度为512个核酸DNA拷贝数;巢氏PCR检测有效范围为921.6 ng/μl～6.8 fg/μl,对应的Ct值为12.04～37.50,其指数关系为:y=(e-0.695x)×1012;R2=0.998 6,巢式PCR扩增效率为2.28×109倍,检测限为2个布鲁氏核酸DNA拷贝数.巢式PCR的灵敏度为91.67％,特异度为93.10％,阳性预测值为91.67％,阴性预测值为93.10％.对一起羊养殖场采集的25份血液标本应用巢式PCR方法检测,结果阳性率为92.00％(23/25);27份健康人群血液标本没有检测出(无Ct值).结论 巢式PCR具有较好的灵敏性和特异性,特别适合于血液标本布鲁氏菌核酸DNA的检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	田国忠	中国疾病预防控制中心传染病预防控制所	25	57	4.0	6.0