microRNA-186-5p及其靶基因CLDN18与甲状腺乳头状癌复发风险的关系

• 作者: 张超杰 徐翰 曾杰 王欣 范培芝
• 来源期刊: 中国普通外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 甲状腺肿瘤 癌,乳头状 微RNAs 肿瘤侵润 计算生物学
• 年，卷（期）: 2020,（11）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1336-1345
• 页数: 10页
• 分类号: R736.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.7659/j.issn.1005-6947.2020.11.007

摘要

背景与目的:microRNA(miRNA)在肿瘤的发生、发展中发挥重要作用,而且不同的miRNA表达状态与肿瘤的不同生物学特征紧密关联.本研究通过分析不同复发风险甲状腺乳头状癌(PTC)患者差异表达的miRNA,筛选与PTC复发风险相关的miRNA,并分析其作用机制.方法:用基因芯片技术分析低危复发风险与中高危复发风险PTC患者血清外泌体中差异表达的miRNA,然后用qRT-PCR方法PTC患者肿瘤组织中验证;用Transwell实验筛选出与PTC细胞侵袭能力有关的差异表达miRNA.通过OncomiR在线数据库对筛选的细胞侵袭力相关miRNA的靶基因进行预测,随后采用过表达与敲低策略,分析PTC细胞相关蛋白表达(Western blot)与PTC细胞侵袭能力(Transwell)的变化,明确细胞侵袭力相关miRNA与预测靶基因的关系.最后,通过GEPIA在线网站对TCGA数据库中PTC临床样本的分析进一步确证.结果:基因芯片分析结果显示,与低危复发风险PTC患者比较,中高危复发风险PTC患者血清外泌体中4个miRNA(miR-186-5p、miR-532-3p、miR-199b-3p、miR-3158-5p)表达上调,1个miRNA(miR-3605-5p)表达下调(均P＜0.05);组织标本qRT-PCR验证结果显示,中高危复发风险PTC患者癌组织中miR-186-5p和miR-3158-5p表达上调(均P＜0.05);Transwell实验结果显示,过表达miR-186-5p后PTC细胞侵袭能力明显增强,敲低则明显减弱(均P＜0.05),但改变miR-3158-5p的表达水平对PTC细胞的侵袭能力无明显影响(均P＞0.05).OncomiR在线数据库预测PRDX6、S100PBP、CLDN18、MAP2可能是miR-186-5p的靶基因;Western blot结果显示,过表达miR-186-5p后PTC细胞中CLDN18的蛋白表达明显降低,敲低则相反,但改变miR-3158-5p的表达水平对其他3个基因的蛋白表达无明显影响;Transwell实验结果显示,过表达CLDN18表达后PTC细胞的侵袭能力明显减弱,敲低则明显增强,而过表达或敲低miR-186-5p对PTC细胞的作用被同时过表达或敲低CLDN18所逆转(均P＜0.05).TCGA数据库分析结果显示,PTC组织中CLDN18表达较正常甲状腺组织明显降低.结论:miR-186-5p表达的增高可能与PTC的复发风险密切相关,机制可能与其通过调节下游CLDN18基因的表达而影响PTC细胞的侵袭能力有关.