4-DAMP抑制A375黑色素瘤增殖作用及机制研究

• 作者: 于佳岐 刘艳 杨希蕊 王丽娟 郭悦平 靳浩槟 高强 魏子湘
• 来源期刊: 海南医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: A375细胞 黑色素瘤 4-DAMP 增殖
• 年，卷（期）: 2020,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 241-250
• 页数: 10页
• 分类号: R739.5
• 字数: 8547字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13210/j.cnki.jhmu.20200205.003

摘要

目的:研究毒蕈碱型M3受体拮抗剂(4-diphenylacetoxy-N-methylpiperidine-methiodide,4-DAMP)对黑色素瘤增殖的抑制作用,从而探讨M3受体拮抗剂在抗肿瘤领域的发展前景及意义.方法:利用MTT[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide]检测肿瘤细胞活力;EdU荧光染色观察细胞增殖情况.成年雄性BALB/c裸小鼠分为对照组、5-氟尿嘧啶(5-Fluorou-racil,5-Fu)组(20 mg?kg-1?d-1)及4-DAMP组(2 mg?kg-1?d-1),建立荷瘤模型.连续给药21 d后处死小鼠,计算抑制率、脾指数.实时定量PCR(quantitative reverse-transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测A375细胞系中M3R、MIA(melanoma inhibitory activity)、SP-1(transcrip-tion factor Sp1)、Lnc-SPRY4-IT1(SPRY4 Intronic Transcript 1)的基因表达.Western Blot检测ERK1/2(extracellular signal-regulated kinase 1/2)蛋白含量的表达.结果:MTT及EdU均表明,4-DAMP可明显抑制A375细胞的活力(P<0.01).动物实验结果表明,5-Fu组与4-DAMP组肿瘤体积及质量均明显减小(P<0.05);H&E染色可见细胞间隙变大,结缔组织纤维增多.qRT-PCR结果表明,4-DAMP或转染si-M3R均可降低细胞内MIA、SP-1以及LncRNA-SPRY4-IT1的表达.Western Blot结果表明,4-DAMP或转染si-M3R后均可降低细胞内ERK1/2的表达.结论:M3受体拮抗剂4-DAMP在细胞及动物实验中均能抑制黑色素瘤增殖发挥抗肿瘤功效,降低肿瘤细胞内MIA、SP-1的mRNA和LncRNA-SPRY4-IT1的表达,同时抑制了ERK1/2的表达.