人非小细胞肺癌NCI-H1299细胞特异性结合肽的筛选及鉴定

• 作者: 左琪 郭超 樊卫平 杨晓峰 张帆
• 来源期刊: 中国肺癌杂志
• 关键词: 噬菌体展示技术 肺肿瘤 NCI-H1299细胞 特异性结合肽
• 年，卷（期）: 2020,（12）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1023-1030
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3779/j.issn.1009-3419.2020.103.17

摘要

背景 与目的非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是最常见的肺癌组织学类型,也是病死率最高的恶性肿瘤之一.多肽作为光学分子成像探针的主体可以实现肿瘤的早期筛查及诊断,提高患者存活率.本研究旨在利用体内噬菌体展示技术筛选与人NSCLC细胞NCI-H1299高度结合的小分子多肽并通过体外实验鉴定其结合特异性.方法 制备NCI-H1299细胞荷瘤裸鼠模型,用噬菌体展示环七肽库进行3轮体内筛选后随机挑取噬菌体克隆,免疫组织化学法及酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)鉴定噬菌体克隆对NCI-H1299细胞的亲和力.提取阳性单克隆噬菌体DNA测序获得外源多肽氨基酸序列,将重复率最高的序列化学合成多肽并进行异硫氰酸荧光素(fluorescein,FITC)标记,制备光学分子探针,初步鉴定其对NCI-H1299细胞的特异性.结果 经3轮体内筛选后噬菌体富集率是首轮的341.3倍;免疫组织化学染色显示随着筛选次数增加,肿瘤组织中结合的噬菌体不断增加,且结合量明显高于正常组织;ELISA结果显示随机挑取的30个噬菌体克隆中20个为阳性克隆,经测序后将重复率最高的序列合成多肽并命名为NSP1;四甲基偶氮唑盐比色法(methyl thiazolyl tetrazolium assay,MTT)、细胞划痕实验表明NSP1不会影响细胞增殖、迁移;流式细胞术、细胞免疫荧光结果表明NSP1可与NCI-H1299细胞特异性结合.结论 利用体内噬菌体展示技术成功得到了与肺癌NCI-H1299细胞特异性结合的多肽NSP1,为NSCLC的早期诊断及靶向治疗奠定了研究基础.