中华鳖StAR基因的克隆、表达及多克隆抗体制备

• 作者: 刘倩 刘慧芬 吴利敏 岑双双 李学军 王璐明 田雪 马晓
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 中华鳖 StAR基因 克隆 表达 性腺 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2020,（11）
• 页码范围: 1813-1823
• 页数: 11页
• 分类号: Q785|S917.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.11964/jfc.20191012034

摘要

为探索StAR基因在中华鳖性腺发育过程中的作用,利用RACE技术克隆获得中华鳖StAR基因全长cDNA,qRT-PCR分析其在不同组织及胚胎不同发育时期的表达情况,并制备多克隆抗体,采用Western blot检测StAR在不同组织中的表达情况,通过免疫组化进行定位,同时检测来曲唑处理雄性中华鳖后StAR在精巢中的表达情况.结果显示,该基因全长2377 bp,开放阅读框903 bp,编码300个氨基酸.氨基酸序列比对及系统进化分析表明,中华鳖StAR与龟类亲缘关系最近.实时荧光定量PCR结果表明,StAR基因在精巢中表达量最高,显著高于其他组织;StAR基因于中华鳖胚胎发育16期已有表达,早于性腺分化启动时期;来曲唑处理的中华鳖精巢中,StAR表达量先上调后回降.本研究利用原核表达系统构建中华鳖StAR基因原核重组表达载体,经蛋白纯化后免疫小鼠,获得中华鳖StAR多克隆抗体.Western blot检测结果显示StAR在不同组织中的表达量与荧光定量结果一致.免疫组化结果显示,StAR蛋白在卵巢间质细胞、精巢间质细胞,精原细胞及胞质中表达.综上所述,StAR基因可能是中华鳖性腺分化关键调控因子,并在类固醇激素合成及精子发生过程中起到重要作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李学军		116	606	14.0	20.0
2	王璐明		10	9	2.0	3.0
3	马晓		8	11	3.0	3.0
4	刘倩		15	47	4.0	6.0
5	田雪		27	54	5.0	6.0
6	吴利敏		11	8	2.0	2.0
7	刘慧芬		6	1	1.0	1.0
8	岑双双		2	0	0.0	0.0