结肠癌患者血清中miR-186-5p表达的研究

• 作者: 于久飞 冀希炜 李珍 杨梦媛 程建平 赵晓琳
• 来源期刊: 中国临床药理学与治疗学
• 关键词: 结肠癌 miR-186-5p 质粒 细胞增殖 顺铂
• 年，卷（期）: 2020,（10）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1097-1104
• 页数: 8页
• 分类号: R965.2|R735.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.12092/j.issn.1009-2501.2020.10.003

摘要

目的:探讨miR-186-5p在结肠癌中的表达及其对于结肠癌的影响,为结肠癌的治疗和预后治疗提供新的治疗靶点.方法:收集本院符合条件的病人血清样本,分为健康组、临床I、II、III、IV期5个组别(n=20),利用miRVana microRNA分离试剂盒提取病人血清中的miRNA,利用荧光实时定量PCR检测miR-186-5p在不同阶段结肠癌病人血清中表达的差异.将miR-186-5p的全长基因克隆到pENTR/D-Topo载体,构建miR-186-5p高表达的细胞系,利用miR-186-5p抑制剂,降低miR-186-5p表达.利用细胞增殖ELISA试剂盒,将5×103/孔的细胞接种到96孔板中,孵育24 h后加入BrdU标记24 h,在370和492 nm测定吸光度,测定miR-186-5p对肿瘤细胞增殖的影响.用MTT法检测miR-186-5p对结肠癌细胞系对化疗药物敏感性的影响.结果:结肠癌病人血清中miR-186-5p呈低表达状态,与正常组相比,临床I、II、III、IV期病人血清中miR-186-5p表达明显减少(P<0.01).利用质粒构建miR-186-5p高表达的细胞系,利用miR-186-5p抑制剂(hsa-miR-186-5p inhibitor)降低SW480、HCT116两种细胞内miR-186-5p的表达.与对照组相比,过表达miR-186-5p的HCT116细胞和SW480细胞增殖能力减弱,说明miR-186-5p表达增多抑制了HCT116细胞和SW480细胞的增殖.miR-186-5p抑制剂处理后,与对照组相比,HCT116细胞和SW480细胞的增殖能力均升高,说明miR-186-5p表达降低可以增加HCT116细胞和SW480细胞的增殖.不同浓度顺铂处理24 h后,高表达miR-186-5p的HCT116和SW480细胞死亡率均高于对照组(P<0.01),miR-186-5 p表达降低后,死亡率低于对照组(P<0.01).在miR-186-5p高表达的结肠癌细胞系中,PLK1蛋白表达降低,而抑制miR-186-5p表达后,PLK1蛋白表达升高.结论:结肠癌患者中miR-186-5p表达降低,过表达miR-186-5p可以抑制结肠癌细胞增殖生长,并降低结肠癌细胞的耐药性,抑制miR-186-5p表达可以增加结肠癌细胞增殖,并增强细胞的耐药性.