下调microRNA-10b通过靶向调控CEBPα表达促进脂肪干细胞的成骨分化

• 作者: 刘晓吉 封建立 朱李茹 杨晓霞
• 来源期刊: 局解手术学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 脂肪干细胞 miR-10b CEBPα 成骨分化 骨组织工程 靶向调控
• 年，卷（期）: 2020,（10）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 774-780
• 页数: 7页
• 分类号: R329.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.11659/jjssx.02E020076

摘要

目的 探讨下调microRNA-10b(miR-10b)对小鼠脂肪干细胞(ADSCs)成骨分化的影响.方法 分离培养小鼠ADSCs,对其进行细胞形态学及流式细胞术鉴定;应用脂质体稳定转染法转染小鼠ADSCs,将转染miR-10b inhibitor、si-CEBPα及miR-10b inhibitor+si-CEBPα的ADSCs依次设为miR-10b inhibitor组、si-CEBPα组及miR-10b inhibitor+si-CEBPα组;同时将上述对应的阴性对照序列转染入ADSCs中,分别记为miR-NC组、si-NC组及miR-NC+si-NC组,正常对照组(control组)为无任何特殊处理的ADSCs;采用RT-PCR法检测转染后ADSCs中miR-10b的表达;生物信息学预测miR-10b与CEBPα的靶向关系,并采用双荧光素酶基因报告实验、实时荧光定量PCR及Western blot验证两者的靶向关系;利用茜素红染色及碱性磷酸酶(ALP)活性检测实验明确miR-10b对小鼠ADSCs成骨分化的影响及CEBPα在其中的作用.结果 与control组和miR-NC组相比,miR-10b inhibitor组小鼠ADSCs中miR-10b的表达显著较低(P<0.05);双荧光素酶基因报告实验、RT-PCR和Western blot实验结果表明,miR-10b可在小鼠ADSCs中靶向调控CEBPα基因的表达,且与miR-NC组相比,miR-10b inhibitor组ADSCs中CEBPα的mRNA及蛋白表达均显著增加(P<0.05);茜素红染色及ALP活性检测结果表明,与control组和miR-NC组相比,miR-10b inhibitor组ADSCs细胞形成的矿化结节及ALP活性均显著增加(P<0.05).功能挽救实验证实,在小鼠ADSCs细胞中同时转染沉默CEBPα的si-CEBPα及miR-10b inhibitor后,miR-NC+si-NC组和miR-10b inhibitor+si-CEBPα组ADSCs细胞形成的矿化结节与ALP活性均较si-NC+miR-10b inhibi-tor组低(P<0.05),且前2组之间无明显差异(P>0.05).结论 在小鼠ADSCs中,下调miR-10b通过靶向调控CEBPα的表达促进脂肪干细胞的成骨分化.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱李茹		3	0	0.0	0.0
2	封建立		1	0	0.0	0.0
3	刘晓吉		1	0	0.0	0.0
4	杨晓霞		2	0	0.0	0.0