基因工程表达内含肽介导的抗菌肽(MME)及其酰胺化

• 作者: 叶若柏 吴珍红 缪晓青
• 来源期刊: 福建农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 抗菌肽 酰胺化 内含肽介导 自剪切
• 年，卷（期）: 2020,（11）
• 所属期刊栏目: 资源与环境科学
• 页码范围: 1265-1270
• 页数: 6页
• 分类号: S816.75
• 语种: 中文
• DOI: 10.19303/j.issn.1008-0384.2020.11.013

摘要

[目的]探讨在巯乙基磺酸钠(MESNa)与碳酸氢铵(NH4HCO3)存在下,对在大肠杆菌上表达的重组融合蛋白中内含肽(Intein)用硫醇(DTT)进行自剪切,促使抗菌肽(MME)碳末端实现酰胺化.[方法]构建用大肠杆菌表达内含肽介导的MME重组质粒,通过表达获得依次由"组氨酸、Sumo标签、MME、内含肽"构成的融合蛋白,用镍柱及透析进行纯化,在MESNa和NH4HCO3存在下,用DTT对内含肽进行自剪切,促使MME碳末端酰胺化,肠激酶切割、纯化,得到碳末端酰胺化的MME.质谱和二级串联质谱配合使用,检测MME及其碳末端酰胺化.[结果]通过PCR,鉴定融合蛋白,其基因片段为837 bp,符合预期.质谱鉴定得MME相对分子量为3057.7与其理论值3057.64一致.二级串联质谱检测得MME碳端碎片的分子量为1214.728,与碳末端酰胺化的MME碳端碎片理论分子量1214.739相符,匹配度为45,表明本研究制备的MME碳末端已被酰胺化,该蛋白为可溶.[结论]用大肠杆菌成功地表达了重组融合蛋白,在MESNa与NH4HCO3存在下,促进了内含肽自剪切,MME碳末端被酰胺化,实现了简单的"一步法"制备.质谱与二级串联质谱配合使用,可灵敏、简单地对碳末端酰胺化多肽进行检测,可作为该项检测方法的一种选择,结果表明,本研究成功地制备了碳末端酰胺化的MME.