基于toxR基因的轮虫弧菌荧光定量微流控快速检测技术的建立

• 作者: 廖梅杰 张正 永翔 王印庚 荣小军 陈京
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 轮虫弧菌 toxR基因 实时荧光定量PCR 微流控快速检测
• 年，卷（期）: 2020,（12）
• 页码范围: 2066-2075
• 页数: 10页
• 分类号: Q785|S917.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.11964/jfc.20191212085

摘要

以轮虫弧菌的单拷贝基因toxR基因的高保守区域为目的片段,设计特异性引物,构建重组质粒标准品,建立针对该菌的荧光定量PCR检测方法.以此为基础,实验选用UF-150 Genechecker微流控荧光定量PCR仪,通过优化反应体系和反应条件,建立了轮虫弧菌的微流控荧光定量PCR检测方法.结果显示,该方法能特异性扩增toxR基因目的片段,对轮虫弧菌纯培养物检测下限为1.34×100拷贝/μL.在人工感染样品中的应用结果显示,对鱼体组织中轮虫弧菌的检测下限为1.34×103 CFU/g,检测结果可以目视判读,检测时间缩短至42 min以内.研究表明,该检测方法具有特异性强、敏感度高、场地要求低等突出优势,适于开发水产病原实用性的现场快速检测技术.