猪病毒性腹泻病相关病原的MLPA检测技术的建立及应用

• 作者: 何海健 刘正奎 吴瑗 周莹珊 宋厚辉 王志鹏 王晓杜 王磊 蒋春燕 陈琳
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪病毒性腹泻 多重连接探针扩增技术(MLPA) 毛细管电泳 灵敏度
• 年，卷（期）: 2020,（9）
• 所属期刊栏目: 研究资源与技术改进
• 页码范围: 1699-1710
• 页数: 12页
• 分类号: S855.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2020.09.018

摘要

每年冬春季爆发于规模化养猪场的腹泻常由不同病毒引起,临床表现为相似腹泻症状.为了区分临床腹泻样本中的病毒性病原体,迫切需求建立一种快速同时检测常见6种病毒性腹泻疾病的病原技术.本研究针对猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S基因、猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)N基因、猪Delta冠状病毒(Porcine delta coronavirus,PDCoV)N基因、猪博卡病毒(Porcine bocavirus,pBCaV)NS1基因、猪诺如病毒(Porcine norovirus,pNoV)RdRp基因、猪轮状病毒(Porcine rotavirus,pRV)NSP1基因的核酸保守区域,设计多重连接探针扩增技术(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)探针和预扩增引物,利用MLPA技术和毛细管电泳技术,建立检测6种疾病病原核酸的检测方法.结果表明,单一探针检测混合模板,显示出高度特异性;混合探针总浓度在1.33 nmol/L时,各种疾病扩增条带具有特异性且与预期大小一致,pBCaV、pNoV、PDCoV、PEDV、pRV、TGEV分别约为102、110、117、124、131、138 bp.本方法与其他临床疾病如猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)、猪瘟病毒(Classic swine fever virus,CSFV)、伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)和猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)没有交叉反应,特异性佳.pBCaV、pNoV、PDCoV、PEDV、pRV、TGEV检测最低极限值分别为:7.58×101、7.56×100、7.54×100、7.53×100、7.50×101和7.49×100 copies/μL.组间和组内重复性好,利用本方法检测临床收集和模拟样本67份,PEDV与病毒分离方法100％符合,pRV、TGEV、pBCaV、pNoV、PDCoV与病毒模拟样本符合率达到100％.本研究为临床提供一种新型的可同时检测6种腹泻病原的技术,为临床疾病防控快速反应提供技术支持.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	何海健		63	163	7.0	9.0
2	蒋春燕		22	71	5.0	7.0
3	王磊		14	41	4.0	5.0
4	吴瑗		21	98	5.0	9.0
5	刘正奎		1	0	0.0	0.0
6	王志鹏		1	0	0.0	0.0
7	陈琳		1	0	0.0	0.0
8	周莹珊		1	0	0.0	0.0
9	宋厚辉		1	0	0.0	0.0
10	王晓杜		1	0	0.0	0.0