siRNA敲减NEK2表达可提高结直肠癌细胞对5-FU的化疗敏感性

• 作者: 崔发财 陈瑜 毋小玉 胡敏 朱亚 刘凤珍
• 来源期刊: 中国肿瘤生物治疗杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 中心体相关激酶2 小干扰RNA 结直肠癌 5-FU 化疗敏感性
• 年，卷（期）: 2020,（11）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1213-1219
• 页数: 7页
• 分类号: R735.3|R730.54|R730.53
• 语种: 中文
• DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2020.11.003

摘要

目的:探讨敲减中心体相关激酶2(never in mitosis A-relatedkinase 2,NEK2)对结直肠癌细胞5-FU化疗敏感性的影响及其可能的机制.方法:采用qPCR和Westenblotting检测结直肠癌细胞中NEK2mRNA及蛋白的表达水平.构建针对NEK2基因的小干扰RNA(siRNA)并转染至结直肠癌细胞HCT116及SW620,实验分为阳性干扰组1(转染NEK2siRNA1)、阳性干扰组2(转染NEK2siRNA2)和阴性对照组(转染si-NC),均用5-FU处理.采用CCK-8实验、V-FICT/PI Annexin双染色流式细胞术实验观察敲减NEK2基因对5-FU作用下结肠癌细胞的增殖、周期分布及凋亡的影响,采用Western blotting检测敲减NEK2基因对5-FU作用下结直肠癌细胞内Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达的影响.结果:NEK2蛋白及mRNA在结直肠癌细胞HCT116、SW620中均呈高表达(P<0.05或P<0.01),转染NEK2 siRNA可高效抑制HCT116、SW620细胞中NEK2蛋白及mRNA表达(均P<0.01).经不同浓度5-FU作用后,阳性干扰组1和阳性干扰组2的细胞存活率和IC50均显著低于阴性对照组(均P<0.01),细胞发生G0/G1期阻滞且调亡率显著升高(均P<0.01),胞核β-catenin、c-myc和cyclin D1表达水平显著下降而胞质β-catenin表达水平升高(均P<0.01).结论:敲减NEK2基因可有效提高人结直肠癌细胞对5-FU的化疗敏感性,该作用可能是通过调控Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达来实现的.