Streptomyces septatus磷脂酶D在毕赤酵母中的重组表达及酶学性质分析

• 作者: MORADANA GAMAGE Rasadi Sajeewa Rajakaruna 刘逸寒 王楠 王爽 路福平 马杰莹 黄琳
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 链霉菌 磷脂酶D 毕赤酵母 表达 酶学性质 磷脂酰丝氨酸
• 年，卷（期）: 2020,（8）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 100-107
• 页数: 8页
• 分类号: Q814
• 字数: 6645字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-20190903-029

摘要

以Streptomyces septatus TCCC 21057基因组为模板,扩增得到磷脂酶D(phospholipase D,PLD)基因(pld),经合成获得pld密码子优化基因(pldm),以pPIC9K为表达载体,毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115为宿主菌株,构建获得毕赤酵母重组菌株GS 115/pPIC9K-pldm,摇瓶发酵后获得的重组PLD (rPLDM)转酯活力达2.37 U/mL;rPLDM经纯化后进行转酯酶学性质分析,其最适作用温度为60℃,最适作用pH值为6.5;在单水相反应体系中,40℃、pH 6.5、Ca2+浓度10 mmol/L、大豆磷脂酰胆碱和L-丝氨酸物质的量比1:10、rPLDM添加4.0 U/mL,反应6h后,磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)的产率可达到33％.本研究通过对rPLDM的重组表达、转酯酶学性质及催化合成PS的研究,为进一步实现酶法合成新资源食品PS奠定了基础.