基于L5178Y细胞体外Pig-a基因突变试验方法的建立与初步探索

• 作者: 文海若 王亚楠 王雪
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: Pig-a基因 L5178Y细胞 体外基因突变 流式细胞术 免疫荧光 遗传毒性
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 220-228
• 页数: 9页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-0855

摘要

利用小鼠淋巴瘤细胞L5178Y tk+/--3.7.2C和阴性化合物Glc、NaCl及阳性化合物EMS、ENU、4-NQO、B(a)P建立并验证基于哺乳动物细胞的体外Pig-a基因突变检测方法.计算细胞相对倍增速率评价细胞毒性,抗体标记突变型细胞确定流式检测模板,L5178Y细胞经EMS处理后第4、8、12、16、20天检测Pig-a基因突变频率,确定最大突变频率发生时间点,免疫荧光技术检测CD90蛋白在细胞中的定位情况,采用PCR方法进行突变位点分析.结果表明:(1)Glc、NaCl、EMS、ENU、B(a)P、4-NQO所设浓度组RPD均大于50％.(2)Pig-a基因突变频率在给药后第8天出现峰值.Glc和NaCl致Pig-a基因突变频率均小于200×10-6,各浓度组与溶剂对照组间不存在显著性差异(P>0.05),EMS、ENU、B(a)P、4-NQO均可引起Pig-a基因突变频率增加,且与溶剂对照组相比存在显著性差异.(3)免疫荧光成像显示突变型细胞表面无CD90蛋白,野生型细胞正常表达CD45,CD90蛋白.(4)基因突变位点检测显示存在G→C、A→C、C→T三种突变类型.基于小鼠淋巴瘤L5178Y细胞分别在有无S9代谢活化条件下成功建立体外Pig-a基因突变的遗传毒性检测方法,旨为化合物体外遗传毒性评价或药物研发早期遗传毒性筛选提供新方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王雪	中国食品药品检定研究院国家药物安全评价监测中心药物非临床安全性评价研究北京市重点实验室	29	48	4.0	6.0
2	文海若	中国食品药品检定研究院国家药物安全评价监测中心药物非临床安全性评价研究北京市重点实验室	38	44	4.0	6.0
3	王亚楠	中国食品药品检定研究院国家药物安全评价监测中心药物非临床安全性评价研究北京市重点实验室	4	0	0.0	0.0