鹦鹉幼稚病PCR诊断方法的建立与应用

• 作者: 吴旭锦 张文娟 朱小甫 熊忙利 邢蕾
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 鹦鹉幼稚病 PCR诊断 多瘤病毒 序列分析
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 19-24
• 页数: 6页
• 分类号: S852.657
• 字数: 4778字
• 语种: 中文

摘要

建立一种鹦鹉幼稚病(BFD)PCR诊断方法,为临床快速确诊鹦鹉幼稚病提供技术手段.参考GenBank中公开的BFDV基因组序列,设计了2对用于阳性质粒构建引物和1对检测引物,采用套式PCR从临床疑似病料中扩增BFDV VP1基因,构建VP1基因阳性质粒,以阳性质粒为模板,优化检测引物扩增体系与条件,进行灵敏度试验、特异性检测和临床样品检测,挑选3份不同地区阳性样品测序验证.结果显示,成功构建了BFDV VP1基因阳性质粒pGEM-T-VP1,建立的PCR检测方法检测下限为105.8 copies/μL.用该方法检测时仅能以pGEM-T-VP1为模板扩增到目的条带,检测5种常见禽病毒均为阴性.应用建立的方法对75份疑似病料进行检测,结果19份为阳性,阳性率为25.3％.测定了3株不同地区BFDV流行毒株VP1基因片段序列,比对分析发现核苷酸序列同源性为99.4％～100％,在基因进化树上这3株病毒处在一个独立的分支上,显示出一定的地域特征.成功建立了一种灵敏度高、特异性好的BFD PCR诊断方法,应用于临床诊断显示出良好效果.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	熊忙利	咸阳职业技术学院畜牧兽医研究所动物疫病分子生物学诊断实验室	46	63	4.0	7.0
2	吴旭锦	咸阳职业技术学院畜牧兽医研究所动物疫病分子生物学诊断实验室	77	171	6.0	10.0
3	朱小甫	咸阳职业技术学院畜牧兽医研究所动物疫病分子生物学诊断实验室	60	121	5.0	8.0
4	张文娟	咸阳职业技术学院畜牧兽医研究所动物疫病分子生物学诊断实验室	19	25	3.0	4.0
5	邢蕾	咸阳职业技术学院畜牧兽医研究所动物疫病分子生物学诊断实验室	12	6	1.0	2.0