羊源布氏杆菌LpxA基因的克隆表达及生物信息学分析

• 作者: 安琪 张萌萌 李宝宝 杜丽 王凤阳 王成强 章泸尹 郑义盈 陈巧玲 陈杰
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 布氏杆菌 LpxA基因 克隆 原核表达 生物信息学分析
• 年，卷（期）: 2020,（2）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 73-79
• 页数: 7页
• 分类号: S852.6
• 语种: 中文

摘要

UDP-N-乙酰葡萄胺酰基转移酶(LpxA)是类脂A生物合成必需的早期酰基转移酶.为了克隆和原核表达羊源布氏杆菌的LpxA基因,PCR扩增LpxA基因并构建pET-28a(+)-LpxA重组质粒,将鉴定正确的重组质粒转化进大肠杆菌BL21 (DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Westem blot鉴定表达产物,对LpxA基因的核苷酸序列及预测的氨基酸序列进行生物信息学分析.结果 显示:成功克隆了837bp的LpxA基因,诱导表达的融合蛋白大小约为35 ku,蛋白的分子式为C1286H2028N388O381S16,分子质量为29 533.58 u,理论等电点为7.32,属弱碱性蛋白;不稳定系数为34.54,属于稳定类蛋白质;疏水指数为83.85,总平均亲水性为-0.067,属于疏水类蛋白;三级结构预测该蛋白为三聚体,属于非分泌蛋白.本研究为进一步阐明羊源布氏杆菌感染宿主过程中自身的免疫逃避的机制及其抑制剂研发提供新的理论依据.