腐食酪螨Tyr p 13克隆表达、纯化及免疫鉴定

• 作者: 刘晓宇 季树宇 杨礼腾 袁如意 钟永浩 陈扬
• 来源期刊: 中国热带医学
• 学科: 医学
• 关键词: 腐食酪螨 Tyr p 13基因克隆表达 蛋白纯化 抗原表位与过敏原性
• 年，卷（期）: 2020,（11）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1031-1035
• 页数: 5页
• 分类号: R384.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.13604/j.cnki.46-1064/r.2020.11.02

摘要

目的 克隆腐食酪螨第13组变应原基因(Tyr p 13),表达纯化其重组蛋白,并进行免疫学特性鉴定,利用生物信息学软件分析该过敏原抗原表位等信息.方法 挑取腐食酪螨,提取螨总RNA.逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增cDNA,根据已知的Tyr p 13基因序列(GeneBank登录号AY710432.1)设计引物,PCR大量扩增目的基因.构建原核表达载体pET-32a(+)-Tyr p 13,转化感受态细胞E.coli Rosetta (DE3),用IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)诱导目的蛋白表达;层析纯化表达产物,免疫印迹(Western Blot)法检测纯化后的表达产物免疫学活性;通过生物信息学软件推测其抗原表位、构建进化树.结果 克隆得到的序列经基因测序可知其长度约400 bp,其表达产物经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分子量约为14 kD,呈可溶性表达.免疫印迹结果显示,Tyr p 13能够与过敏患者血清IgE特异性结合,表明其具有过敏原性;表位分析进一步证实该过敏原具有免疫原性.结论 经克隆表达、纯化后得到纯度较高的腐食酪螨Tyr p 13,为进一步开展临床特异性诊断和治疗提供参考.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘晓宇		42	160	7.0	11.0
2	陈扬		3	14	2.0	3.0
3	袁如意		4	2	1.0	1.0
4	季树宇		2	0	0.0	0.0
5	杨礼腾		2	0	0.0	0.0
6	钟永浩		1	0	0.0	0.0