高糖对人角膜上皮细胞创伤修复中Cyclin D1蛋白表达的影响

• 作者: 修皓 唐平 籍雪颖 赵楠楠 郑振优 陈梨萍
• 来源期刊: 国际眼科杂志
• 关键词: 高糖 人角膜上皮细胞 Cyclin D1蛋白 创伤
• 年，卷（期）: 2020,（9）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1504-1508
• 页数: 5页
• 字数: 5213字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3980/j.issn.1672-5123.2020.9.07

摘要

目的:研究高糖环境对人角膜上皮细胞损伤修复的影响,初步探讨Cyclin D1蛋白在高糖培养的角膜上皮细胞创伤愈合中表达的意义.方法:模拟糖尿病角膜病变的高糖微环境,人角膜上皮细胞经复苏、培养传代后,分别设置等体积蒸馏水的DMEM完全培养基的正常对照组和含25mmol/L葡萄糖的DMEM完全培养基高糖处理组的两组细胞,细胞长满后进行划伤刺激,倒置相差显微镜下观察比较各组细胞生长状况及其变化,于不同时间点(0、12、24、48和72h)利用Western blot检测分析高糖培养的角膜上皮细胞中Cyclin D1蛋白的表达,qRT-PCR检测Cyclin D1 mRNA水平相对表达情况.结果:体外高糖处理条件下,人角膜上皮细胞划伤后修复速度减慢,漂浮细胞增多,细胞重新贴壁少,细胞间距增加,随着高糖处理时间的延长,细胞状态变差,生长速度慢;正常组细胞损伤修复较快,细胞密度增大,且形态规则,细胞膜光滑.Western blot检测划伤刺激上调Cyclin D1的表达,但随着时间延长上调作用呈逐渐减弱,两组Cyclin D1最高表达量均出现在12h.高糖处理组Cyclin D1表达量低于正常对照组.qRT-PCR结果显示:高糖处理后,Cyclin D1 mRNA表达呈上调趋势,但随着高糖处理时间延长,上调作用减弱,且在48h处mRNA水平恢复至与对照组同一水平.结论:在角膜上皮细胞创伤愈合过程中,高糖呈负性调节,抑制Cyclin D1蛋白的表达,且与角膜上皮细胞增殖能力下降及凋亡相关.