柑橘叶斑驳病毒的RT-LAMP检测

• 作者: 黄爱军 丁敏 王莹 苏华楠 易龙
• 来源期刊: 园艺学报
• 学科: 农学
• 关键词: 柑橘 柑橘叶斑驳病毒 环介导等温核酸扩增技术
• 年，卷（期）: 2020,（11）
• 所属期刊栏目: 新技术新方法
• 页码范围: 2215-2222
• 页数: 8页
• 分类号: S666
• 语种: 中文
• DOI: 10.16420/j.issn.0513-353x.2020-0033

摘要

建立了柑橘叶斑驳病毒(citrus leaf blotch virus, CLBV)的RT-LAMP (Reverse transcription loop-mediated isothermal amplification)检测方法,并对其灵敏度和准确性进行验证.根据CLBV的外壳蛋白序列设计引物,筛选出特异性较好的一组引物,进行扩增时间及温度等条件优化.优化后反应体系可在65 ℃条件下,60 min内完成扩增.所建立体系特异性好,灵敏度高,最低可从23.2 pg · μL-1的模板中检测出CLBV,扩增结果可通过加入SYBR green I染料方法直接观察.用RT-LAMP方法对田间采集的120份柑橘样品进行检测,不同来源样品检出率在0～15％之间,与普通RT-PCR方法检出结果一致.