蜡样芽孢杆菌胶原蛋白酶基因的异源表达与活性分析

• 作者: 刘丽莉 尤晓颜 李玉 杨陈柳 梁严予
• 来源期刊: 中国食品学报
• 关键词: 蜡样芽孢杆菌MBL13-U 胶原蛋白酶 大肠杆菌 异源表达 活性分析
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 69-75
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.16429/j.1009-7848.2020.01.009

摘要

研究采用降解骨胶原蛋白的蜡样芽孢杆菌MBL13-U作为原菌种,并对蜡样芽孢杆菌MBL13-U进行全基因组测序,克隆获得胶原蛋白酶(ColM13)基因.将目的基因与大肠杆菌的表达载体pET30a进行连接,转入大肠杆菌宿主菌株BL21,获得降解骨胶原蛋白的工程菌pET30a-ColM13/BL21.通过SDS-PAGE测定异源表达的重组蛋白酶ColM13的分子质量,并测定不同诱导时间和诱导浓度对ColM13酶活性的影响,最终确定重组蛋白酶ColM13的酶活最适条件:6‰异丙基硫代半乳糖苷(IPTG,100 mmol/L),37℃诱导6 h,优化后酶活力最高为64.99 U/mL,较优化前提高4.24倍.通过水解圈试验、紫外光谱和扫描电子显微镜等方式验证,表明工程菌构建成功,这为我国畜禽骨骼资源的深度开发和综合利用提供了新的研究思路.