黔北麻羊SRD5A2基因干扰载体构建及其对产羔相关基因表达的影响

• 作者: 周志楠 唐文 段志强 洪磊 赵佳福 陈祥
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 黔北麻羊 SRD5A2基因 RNA干扰 卵巢颗粒细胞 产羔性状
• 年，卷（期）: 2020,（12）
• 所属期刊栏目: 遗传育种
• 页码范围: 2980-2990
• 页数: 11页
• 分类号: S827.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2020.12.008

摘要

旨在探究SRD5A2基因对山羊产羔性状相关基因表达的影响.本研究选择健康的(2～3岁)黔北麻羊经产母羊3只,体重约32 kg,采集卵巢组织并成功培养卵巢颗粒细胞.通过在线软件设计SRD5A2基因的4对siRNA干扰序列和1对阴性对照序列,连接pGPH1/GFP/Neo载体后,将构建成功的干扰载体转染至黔北麻羊卵巢颗粒细胞.利用qRT-PCR方法筛选出干扰效率最佳的载体,检测其对SRD5A2基因表达的影响.运用qRT-PCR检测沉默SRD5A2基因对山羊产羔性状相关基因骨形态发生蛋白15(BMP15)、生长分化因子9(GDF9)、骨形态发生蛋白1B(BM PR-1B)和卵泡刺激素β亚基(FS Hβ)表达的影响.结果表明,本试验在培养黔北麻羊卵巢颗粒细胞的基础上,成功构建了黔北麻羊SRD5A2基因的干扰载体,并筛选出shRNA-SRD5A2-1干扰效果最佳(P<0.01);抑制SRD5A2基因表达后,qRT-PCR检测产羔性状相关基因BMP15、BMPR-1B、GDF9和FSHβ的表达量均显著降低,BMP15的表达量极显著低于shRNA-NC对照组(P<0.01),BMPR-1B、GDF9和FSHβ的表达量显著低于shRNA-NC对照组(P<0.05).本研究成功构建了SRD5A2基因干扰载体并转染至卵巢颗粒细胞,发现体外沉默SRD5A2基因可抑制产羔性状相关基因的表达,提示SRD5A2基因与黔北麻羊产羔性状密切相关,本试验结果为进一步研究SRD5A2基因对黔北麻羊产羔性状的调控机制提供了基础.