截短型金属蛋白酶ADAM10对Aβ42的水解作用

• 作者: 孙曼霁 孙鑫 张芳 李前 李琪琪 王紫瑈 符馨月 赵宝全 陈豪
• 来源期刊: 中国新药杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 解整合素样金属蛋白酶10 阿尔茨海默病 β-淀粉样蛋白
• 年，卷（期）: 2020,（10）
• 所属期刊栏目: 重大新药创制专项巡礼
• 页码范围: 1103-1109
• 页数: 7页
• 分类号: R964
• 字数: 6303字
• 语种: 中文

摘要

目的:解整合素样金属蛋白酶1 0(disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 10,ADAM 10)是一种重要的膜锚定金属蛋白酶,参与多个重要生理过程,同某些癌症和神经退行性疾病有重要联系.拟通过毕赤酵母表达系统表达ADAM 10的金属蛋白酶结构域,探究ADAM 10对β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ42)的作用.方法:首先通过数据库检索的方式获得所需序列,将密码子进行酵母偏好性优化后,插入至pPIC9k分泌表达载体上.通过电转化、阳性筛选、多拷贝子筛选等过程后,用蛋白印迹(WesternBlot)的检测方式筛选出能够表达重组蛋白并将其有效分泌至培养基中的阳性菌株.分别用Tricine-SDS-PAGE电泳结合Western Blot和高效液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)的方法检验截短型ADAM 10(sADAM10)对Aβ42的水解作用,并用硫黄素T(thioflavin T,ThT)荧光实验检验sADAM 10对Aβ42聚集的影响.结果:通过毕赤酵母表达系统成功分泌表达了sADAM 10,其分子量在35 kD左右,为已成功切除了前导肽的并在金属蛋白酶结构域中的糖基化位点上进行糖基化的成熟蛋白酶;重组蛋白能水解Aβ42,在一定程度上抑制Aβ42聚集,其被检测到的水解位点位于Aβ42多肽的中段.结论:sADAM 10具有作为阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)治疗药物的可能性.