细胞周期检查点激酶1的表达对猪卵母细胞体外成熟的影响

• 作者: 韩国波 李英花 叶孟傲然 许永男
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 关键词: 猪 卵母细胞 体外成熟 Chk1 chir-124
• 年，卷（期）: 2020,（11）
• 所属期刊栏目: 遗传繁育|ANIMAL GENETICS & REPRODUCTION
• 页码范围: 7-13
• 页数: 7页
• 分类号: S828.9+9
• 语种: 中文

摘要

细胞周期检查点激酶1 (Chk1)作为DNA复制检查点和DNA损伤反应的重要成员,在有丝分裂和减数分裂中都具有重要作用.为探究Chk1对猪卵母细胞减数分裂的影响,本研究首先采用免疫荧光染色和实时荧光定量PCR技术检测了Chk1在猪卵母细胞不同时期的表达和定位,随后利用chir-124抑制Chk1的表达,研究其对猪卵母细胞减数分裂的影响,以及相关基因的表达和纺锤体的变化.结果 表明,Chk1在4个时期(GV、GVBD、MⅠ、MⅡ)均有表达,GV期主要定位在生发泡内,GVBD期主要定位在核周围,MⅠ期和MⅡ期主要定位在纺锤体上;用不同浓度的chir-124处理卵母细胞来抑制Chk1,发现0.5μmol/L的chir-124对卵母细胞生发泡破裂(GVBD)的影响最大,可显著提高猪卵母细胞处于GV-Ⅳ期的比例(P＜0.05),并且可显著提高卵母细胞达到GVBD期的比率(P＜0.05),但对后续的成熟没有显著影响;随后对MⅡ期卵母细胞的基因表达进行检测发现,Chk1的抑制可调节cdk1、cdc25C、cyclin61基因的表达,并使gwl基因的表达显著下降(P＜0.05),从而调节卵母细胞恢复减数分裂的进程;Chk1的表达会激活纺锤体组装检查点(SAC),阻止同源染色体分离,将猪卵母细胞定位在MⅠ期,而减少Chk1的表达后,猪卵母细胞可渡过MⅠ期,进入MⅡ期.综上,在GV期使用chir-124抑制Chk1的表达可促进猪卵母细胞恢复减数分裂,并促进后续的成熟.