TGFβ2和PPP3CA基因在黔北麻羊性腺轴组织表达及对卵巢颗粒细胞的调控研究

• 作者: 吴雨 周志楠 张艳 惠茂茂 敖叶 杨沛方 陈祥 韦仕南 骆金红
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 黔北麻羊 TGFβ2基因 PPP3CA基因 卵巢颗粒细胞 差异表达
• 年，卷（期）: 2020,（11）
• 所属期刊栏目: 生物技术与繁殖
• 页码范围: 2699-2709
• 页数: 11页
• 分类号: S827.2|S827.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2020.11.009

摘要

旨在对转录组测序中单羔组对多羔组TGFβ2和PPP3CA基因的上、下调结果进行验证,并探究黔北麻羊TG Fβ2和PPP3CA基因对卵巢颗粒细胞的调控机制.本研究以单、多羔黔北麻羊母羊为试验对象.通过RT-qPCR技术检测TGFβ2与PPP3CA基因在单、多羔黔北麻羊性腺轴中的表达水平;构建目的基因真核表达载体.培养黔北麻羊卵巢颗粒细胞,并利用脂质体转染法将pEGFP-N3-TGFβ2、pEGFP-N3-PPP3CA重组质粒导入卵巢颗粒细胞,检测培养基中雌二醇(E2)、孕酮(P4)的浓度.利用CCK-8和Annexin V-FITC法检测TGFβ2、PPP3CA基因对卵巢颗粒细胞增殖、凋亡的影响.随后,利用RT-qPCR从细胞水平检测超表达TGFβ2、PPP3CA基因对TGFβ2、PPP3CA、GnRHR、FSHR、BMP4、TIMP3基因表达的影响.RT-qPCR结果表明,TGFβ2与PPP3CA基因在被检测的组织中均有表达,且在单羔组中的表达量普遍高于多羔组;免疫荧光法证实,所培养的细胞为黔北麻羊卵巢颗粒细胞;TGFβ2与PPP3CA基因真核表达质粒导入细胞后,在极显著提高TGFβ2与PPP3CA基因表达的同时,能够极显著地抑制卵巢颗粒细胞中FSHR、GnRHR、BMP4、TIMP3基因的表达(P<0.01).细胞增殖与凋亡结果显示,TG Fβ2与PPP3CA基因能够促进颗粒细胞凋亡,抑制其增殖.酶联免疫吸附试验结果表明,TG Fβ2与PPP3CA基因能够显著促进E2的分泌,但对P4的分泌无显著影响.本研究成功构建了TG Fβ2、PPP3CA基因真核表达载体,荧光定量结果表明,超表达TGFβ2、PPP3CA基因抑制了繁殖相关基因的表达,提示TGFβ2、PPP3CA基因对山羊繁殖相关基因表达有一定的影响.为进一步研究TGFβ2、PPP3CA基因对黔北麻羊繁殖力的影响提供基础数据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	敖叶		1	0	0.0	0.0
2	陈祥		1	0	0.0	0.0
3	周志楠		1	0	0.0	0.0
4	骆金红		2	0	0.0	0.0
5	韦仕南		1	0	0.0	0.0
6	张艳		1	0	0.0	0.0
7	惠茂茂		1	0	0.0	0.0
8	吴雨		1	0	0.0	0.0
9	杨沛方		1	0	0.0	0.0