补肾通络方对骨质疏松斑马鱼效应评价及破骨细胞自噬机制

• 作者: 万仕炜 刘军 张农山 张玉 方彭华 谭登 闵文 韩龙
• 来源期刊: 中国实验方剂学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 斑马鱼 骨质疏松 补肾通络方 破骨细胞 自噬
• 年，卷（期）: 2020,（7）
• 所属期刊栏目: 药理
• 页码范围: 79-85
• 页数: 7页
• 分类号: R2-0|R289|R285.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.13422/j.cnki.syfjx.20200641

摘要

目的:评价补肾通络方对斑马鱼骨质疏松模型的干预效应,并明确其对破骨细胞分化的自噬调控机制.方法:选取新生3d健康斑马鱼幼鱼260尾,25 mmol· L-1泼尼松龙(Pred)干预3d,通过钙黄绿素染色确认建模成功,分为空白组,Pred组(25 mmol· L-1),依替磷酸二钠组(300 mg· L-1),补肾组(180 mg· L-1),通络组(30 mg· L-1)和补肾通络组(210 mg·L-1)各40尾.药物干预4d后采用钙黄绿素染色后拍照,统计斑马鱼脊椎骨荧光面积;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测斑马鱼碱性磷酸酶(ALP),骨形态发生蛋白-2b(BMP-2b),Runt相关转录因子2(Runx2),组织蛋白酶K(CTSK),抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)及活化T细胞核因子(NFATC-1) mRNA表达.培养RAW264.7细胞至80％～90％密度后分为空白组,Rankl诱导组(10 μg·L-1),补肾组(180 mg·L-1),通络组(30 mg· L-1)和补肾通络组(210 mg·L-1).经Rankl诱导细胞破骨分化及药物干预4d后,采用FITC标记鬼笔环肽染色检测肌动蛋白环表达,Real-time PCR检测RAW264.7细胞TRAP,CTSK和自噬相关基因5(ATG5),自噬相关基因7(ATG7),泛素结合蛋白62(p62) mRNA表达.结果:在体内研究中,与空白组比较,Pred组斑马鱼椎骨面积及ALP,BMP-2b,Runx2表达显著下降(P＜0.01),CTSK,TRAP,NFATC-1表达显著升高(P＜0.01).与Pred组比较,通络组椎骨面积明显增加(P＜0.05),而补肾通络组椎骨面积显著增加(P＜0.01),补肾组,通络组及补肾通络组ALP,BMP-2b,Runx2表达均显著升高(P＜0.01),补肾通络组CTSK,TRAP,NFATC-1表达明显降低(P＜0.05,P＜0.01).体外研究显示,与空白组比较,Rankl诱导组肌动蛋白环数目显著增多(P＜0.01),CTSK,TRAP和ATG5表达显著升高(P＜0.01),ATG7,p62表达明显升高(P＜0.05).与Rankl诱导组比较,补肾组、通络组及补肾通络组均明显减少了肌动蛋白环数目及CTSK,TRAP表达(P＜0.05,P＜0.01),而补肾通络组同时降低了ATG5,ATG7,p62表达(P＜0.05,P＜0.01).结论:补肾通络方能够显著改善泼尼松龙诱导的斑马鱼骨质疏松症,并通过降低自噬相关基因表达抑制破骨细胞分化.