改良组织块培养法体外培养人角膜上皮干细胞

• 作者: 余晓菲 王丽娅 许中中
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 角膜上皮干细胞 无血清培养 组织块培养 改良 K3 p63 标记物
• 年，卷（期）: 2020,（25）
• 所属期刊栏目: 干细胞培养与分化
• 页码范围: 4012-4017
• 页数: 6页
• 分类号: R459.9|R394.2|R772.2
• 字数: 6398字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2097

摘要

背景:角膜上皮干细胞定位于角膜缘,又称之为角膜缘干细胞,临床上由于眼表严重热烧伤、化学性烧伤、慢性炎症等原因引起的角膜缘干细胞缺乏或功能障碍治疗较为棘手.目前利用组织工程技术体外培养角膜上皮干细胞并进行临床移植成为新型有效的治疗方向.目的:探讨在无血清培养条件下采用改良组织块培养法培养人角膜上皮干细胞的可行性.方法:人角膜缘组织来自河南省眼库,植片直径小于8 mm角膜移植术后的供者剩余眼球材料,手术显微镜下剖取角膜缘上皮层外2/3区域,采用2种方法培养人角膜上皮干细胞,常规组织块培养组是将组织块上皮面向上贴壁,加入K-SFM培养液后置于37℃、体积分数为5％CO2细胞培养箱中培养;改良组织块培养组是先将组织块浸泡于K-SFM培养液中,置于细胞培养箱中孵育12 h,然后组织块上皮面向下贴壁培养.组织块周边有细胞游离出贴壁生长记作"培养第1天",每日相差显微镜下观察细胞生长变化.利用免疫荧光染色技术检测改良组织块培养第5,10,14天时原代细胞中p63及K3的表达.结果与结论:①改良组织块培养组出膜时间明显短于常规组织块培养组(P<0.05),出膜率明显高于常规组织块培养组(P<0.05);②改良组织块培养组细胞生长状态良好,培养第10天可见小体积细胞较多,聚集成灶状分布;培养第14天可见细胞克隆灶,克隆灶内细胞体积较小,形态均一;③培养第5天,K3表达量较多,p63表达量较少;培养第10天,K3和p63表达量均增多;培养第14天,K3表达量未见明显增多,p63表达量明显增多;④在无血清培养条件下,改良组织块培养法能显著促进角膜上皮干细胞的游离,提高体外培养细胞数量,为人角膜缘上皮组织片的构建提供种子细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王丽娅	河南省人民医院眼科	4	2	1.0	1.0
2	许中中	郑州人民医院眼科	3	0	0.0	0.0
3	余晓菲	河南省人民医院眼科	3	0	0.0	0.0