1种检测弓形虫急性感染的夹心ELISA方法

• 作者: 刘晶 刘群 李祎 杨旭 王先梅 王飞 许建海 邓均华
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 弓形虫急性感染 GRA1单克隆抗体 循环抗原 双抗体夹心ELISA
• 年，卷（期）: 2020,（12）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 3101-3110
• 页数: 10页
• 分类号: S852.72
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2020.12.019

摘要

弓形虫(Toxoplasmagondii)是一种人畜共患机会性致病原虫,其急性感染可导致宿主产生明显的临床症状和严重的病理损伤.弓形虫致密颗粒蛋白1(dense granuleprotein 1,GRA1)是一种良好的诊断抗原,也是弓形虫急性感染的标志物循环抗原(circulating antigen,CAg)的重要组分.本研究利用TgGRA1单克隆抗体建立双抗体夹心ELISA方法,为急性弓形虫感染的检测提供依据.将免疫GRA1-His的小鼠脾细胞与SP2/0进行融合,筛选出能稳定分泌抗体的杂交瘤细胞.选择其中一种单抗与HRP标记后的鼠源GRA1多抗配对,建立1种双抗体夹心ELISA方法,检测人工感染弓形虫的猪和小鼠血清样品,并将检测效果与巢式PCR(nest PCR,nPCR)和商品化试剂盒进行比较.结果筛选到4株杂交瘤细胞,腹水效价为106～107,亚型均为IgG1;IFA和Western blot结果显示,4株单抗均具有良好的反应性和特异性.选择1G2单抗和HRP标记多抗配对,建立了循环抗原双抗体夹心ELISA方法,最低能够检测到血清中1.563 ng·mL-1 GRA1抗原,或者100 ng·mL-1 ESA.该方法与nPCR相比具有较高的一致性,较市售商品化试剂盒更为准确可靠.本研究第1次将GRA1抗原作为急性弓形虫感染的诊断指标,建立相应的检测方法,成功地在人工感染样品中检测到弓形虫急性感染,可为弓形虫急性感染的诊断提供参考,对临床上急性弓形虫病的治疗有指导意义.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨旭		24	72	4.0	8.0
2	刘晶		25	249	9.0	15.0
3	刘群		64	836	17.0	27.0
4	王飞		11	51	2.0	7.0
5	许建海		8	41	4.0	6.0
6	李祎		1	0	0.0	0.0
7	王先梅		1	0	0.0	0.0
8	邓均华		1	0	0.0	0.0