基于NS4蛋白的蓝舌病病毒间接ELISA抗体检测方法的建立及初步应用

• 作者: 刘倩如 夏宇 姚婷 张金阳 易华山 曹慧贞 朱文青 李前勇 李欢 杨发挥 谢远兵 赵瑶 陈思倩 马鲜平 高丽旭 魏晓蓉
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 蓝舌病病毒 NS4基因 原核表达 间接ELISA
• 年，卷（期）: 2020,（12）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 3133-3140
• 页数: 8页
• 分类号: S852.659.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2020.12.022

摘要

旨在建立蓝舌病病毒(BTV)血清学ELISA抗体检测方法,本研究以原核表达并纯化的BTV NS4重组蛋白为包被抗原,通过反应条件优化,建立了一种BTV重组NS4蛋白的间接ELISA抗体检测方法.SDS-PAGE结果显示,获得大小约52 ku的NS4重组融合蛋白,主要在上清中存在,Western blot显示,纯化后的重组蛋白具有良好的抗原性.通过方阵试验进行了ELISA反应条件优化,确定了重组蛋白抗原最佳包被量为3.0μg·孔-1;血清最佳稀释倍数为1:200,酶标二抗最佳工作浓度为1:4000,临界值分别为0.29和0.35.上述以NS4蛋白作为包被抗原建立的BTV抗体间接ELISA方法检测敏感性可达1:1600;批内和批间重复性变异系数均小于10％;检测76份重庆地区牛群血清样品,阳性符合率为98％,阴性符合率为100％.本研究建立的间接ELISA方法为临床BTV血清抗体检测及BTV血清流行病学调查奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李欢		13	19	2.0	3.0
2	张金阳		19	19	3.0	4.0
3	姚婷		2	4	1.0	2.0
4	易华山		1	0	0.0	0.0
5	赵瑶		1	0	0.0	0.0
6	马鲜平		1	0	0.0	0.0
7	夏宇		1	0	0.0	0.0
8	朱文青		1	0	0.0	0.0
9	刘倩如		1	0	0.0	0.0
10	陈思倩		1	0	0.0	0.0
11	曹慧贞		1	0	0.0	0.0
12	高丽旭		1	0	0.0	0.0
13	杨发挥		1	0	0.0	0.0
14	魏晓蓉		1	0	0.0	0.0
15	李前勇		1	0	0.0	0.0
16	谢远兵		1	0	0.0	0.0